一 : MTT实验操作步骤

MTT的操作方法

一、MTT是什么

MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。［www.61k.com]是一种黄颜色的染料。

二、MTT法用来做什么

简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。

MTT主要有两个用途

1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；

2．细胞增殖及细胞活性测定。

三、为何MTT可以用来做上述工作

检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

四、实验所需材料

1．MTT 溶液的配制 通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS或生理盐水做溶剂。 市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g

1.1对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。 具休做法：预

mtt MTT实验操作步骤

先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。(www.61k.com]可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。

1.2对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。

注意事项：

l在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。

l配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感

lMTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内（个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。

lMTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.

2．MTT甲瓒溶解液

2.1二甲基亚砜DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。

2.2三联溶解液：SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml 用双蒸水溶解配成100ml溶液（文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT方法，中国医药工业杂志，1993，24

（10）：455-457），该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。（个人觉得其溶解的能力不如DMSO强）

mtt MTT实验操作步骤

该溶解液因含有SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将SDS结晶全部溶解后再使用。[www.61k.com）

五、MTT法实验步骤

1: 胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至5-10×104/ml。

细胞详细计数方法请参照易生物实验技术中的相关文章。

对于初学者而言，要使细胞达到5-10×104/ml往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。

以一般细胞培养常用的25cm2为例，

1)细胞密度在长到约80%~90%（下图所示为80%~90%密度时细胞的大致状态），消化离心收集后，将上清去掉，加入3ml培养基使其混匀。

2)另取一支新的15ml无菌离心管（为下一步接种96孔板用），装入约9ml培养基.

3)从第一步准备的3ml细胞悬液中取1ml, 加入上管，混匀后细胞计数，此时一般为或小于5-10×104/ml，该浓度相当于细胞计数板4个大格内每大格平均5-10个细胞（见下图）；如果不够该浓度，再根据计数的结果滴加细胞悬液，每滴按50ul计算。

mtt MTT实验操作步骤

)细胞数量因实验目的不同应做相应调整，如一般细胞增殖实验每孔2000个就可以（相当于细胞悬液密度为2×104/ml），细胞毒性实验每孔5000—10000个（相当于细胞悬液密度为5×104/ml）。［www.61k.com)此外，还应根据细胞本身特性，如生长快慢，来决定细胞数量。比如：生长较快的细胞密度可略小。

2．将细胞悬液制备好后，轻轻混匀，每孔加入100ul, 这样待测细胞的密度为5000—10000/孔（边缘孔用无菌PBS填充）。

l注意：因细胞在混匀后仍要继续沉降，因此接种的过程中要反复多次混匀，如每加6个孔就混匀一次，以确保接种的细胞密度在各孔之间完全相同，这对于MTT的结果至关重要。

3.将接种好的细胞培养板放入培养箱中培养，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设6个，否则难以反应真实情况。下图可做为96孔板的的参考步局。

l对于加药，有人直接将药物按不同体积加入到96孔板中，以形成浓度梯度。但本人认为应尽量在EP管中将不同浓度的药物配好，然后将96孔板中的培养上清去掉（可以用排枪吸走）再加入100ul含不同浓度药物的培养基，这样能保证药物浓度的准确。另外，需注意的是，如果用这种方法，不要把96孔板的培养液全部吸走后再加药，应该吸完一部分后立即加样，避免由于96孔板干燥引起细胞死亡。

4.5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察药物的作用效果。下图为一典型的药物梯度为细胞的毒性作用。

mtt MTT实验操作步骤

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5.每孔加入10ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。（www.61k.com)若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

6. 终止培养，准备溶解结晶。

l 溶解结晶的方法有两种，第一种，用DMSO溶解

1) MTT加入培养4h后，结晶可充分形成。将上清去掉，该过程要注意不能把Formazan结晶移走。有人直接用移液器将上清移走，也有人建议先铺几张滤纸在桌面，然后将96孔板轻轻倒置，这样上清便被滤纸吸走，以减少结果的损失。个人认为，这两种方法都有可能导致结晶的损失，从而引起结果的不准确。采用哪种方法，可以自己摸索一下再决定。

2) 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

mtt MTT实验操作步骤

l 另一种方法，用三联溶解液（见上面MTT甲瓒溶解液）

1) MTT加入培养4h后，结晶可充分形成。（www.61k.com）这种方法细胞上清可以不用去掉，直接在每孔加入100ul溶解液。（该溶解液因含有SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将SDS结晶全部溶解后再使用。）

2) 放入培养箱中继续孵育4—6小时，镜下观察，待结晶全部溶解后570nm测吸光度。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。

在实际的操作过程中，往往为了等待4—6小时，使得实验者在下班以后或者晚上来测OD值，给实验者带来了很大的不方便。个人曾经摸索，加入溶解液后过夜再测对OD值基本无影响，但要注意的是一定要避光，不过培养箱关闭后本身就是闭光的，所以加入溶解液后放入培养箱中，第二天上班时再测OD值就可以了。

7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。

六、MTT结果分析

关于如何计算IC50

1、改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)

Xm:lg 最大剂量

I:lg(最大剂量/相临剂量)

P:阳性反应率之和

Pm:最大阳性反应率

Pn:最小阳性反应率

举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得MTT值如下

mtt MTT实验操作步骤

公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率

抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值，如对于100ug/ml的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下：

代入计算公式：

Pm=0.869

Pn=0.135

P=0.869+0.849+0.616+0.391+0.282+0.135=3.142

Xm=lg100=2

lgI=lg100/50=0.301

lgIC50=2-0.301*(3.142-(3-0.869-0.135)/4)=1.655

IC50=45.186

该药物的IC50值为45.186ug/ml

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二 : 介绍电解水机标准用语及实验步骤

介绍电解水机标准用语

1. 营业员五指并拢，指向电解水机机头说：

这是日本原装进口的雅马哈电解水机，在日本已经有20多年的销售历史，目前大约70%的家庭都会用到这样的电解水机；日本更是世界上对碱性水研究时间最长的国家，已经超过40年。

客户问：什么是电解水机？ 电解水机就是将净化后的水，通过电解的方式，进行了更高级的处理，将水细分为碱性水、酸性水、净水等多种功能性用水。 雅马哈碱性水不仅是干净、好喝的水，而且能改善身体体质，增加人体免疫力，长期饮用对各种疾病有一定疗效。

2. 客户问：为什么会有这些功能？

营业员说：老师，耽误你2、3分钟时间，我可以边做实验边讲解，您就更清楚碱性水给您带来的好处了！

电解水机实验步骤介绍

实验目的: 水经过电解后，有正极必有负极，因此有酸性必有碱性；水中的钙、镁、钠、钾等正离子被阴极吸收，氢氧根离子增加而形成碱性，这样就可以中和人体内的酸毒，改善酸性体质。其中酒精呈酸性，喝碱性水可以中和人体内的酸根离子，从而达到身体酸碱度平衡。这也是为什么人们说喝碱性水好的真正原因。

实验目的：一般的水约为13到16个分子团，经电解后水分子团约为5到6个，因为矿物质已被离子化，所以水的渗透力和溶解力更强，人体容易吸收，更能有效清除细胞及血液中的油脂及其他废旧物质，从而促进新陈代谢。

实验目的：碱性水具有负250MV以下的氧化还原电位，能迅速清除人体内多余自由基（活性氧），中和酸毒，清除人体致病因子。自来水不具有细小分子团和还原电位的特点；对身体没有任何改善作用。其中碱性水中含氧量高，活性氧量大，是有益身体的健康好水（每升约5毫克氧）。

实验目的：证明料理用碱性水是小分子团、抽出能力及溶解力更强。并且能够更好的提取出茶叶中的精华。同理，这也是为什么用碱性水煮米饭能够使米饭更有嚼劲，颗粒更饱满的原因。

3. 料理用水有什么用处？

1）对饮食有益的水：其实，它就是子团水，能在烹调食物的时候起到提味的作用，煲汤也可不放味精；同时，它还有良好的冲泡作用，可使茶和咖啡的口感更好；用它煮出来的米饭，更加蓬

松可口；蔬菜瓜果在碱性水中浸泡30分钟以上，可祛除残留农药（因为农药呈酸性，酸碱可中和达到祛除农药的作用），并且浸泡后的食物更新鲜不易被腐坏；

2）对肠胃好的水多、胃溃疡有一定的疗效；在日本以上碱性水功能已经过临床证明；

3）对身体好的水痛风、动脉硬化等。

4. 饮用水有什么好处

它是PH值7.5到8.5之间的弱碱性水，建议大家从弱碱性水开始使用，以适应肠道反应。并且在做米饭的时候，加入此水，能让煮出来的米饭，颗粒饱满，香甜可口。

5. 净化水有什么好处

中性净水，是去除了水中有害物质的安全直饮水，建议用作服药和冲泡牛奶时使用。

6. 酸性水有什么好处

1）对美容好的水人体的皮肤表面PH值呈弱酸性，用酸性水洗脸，可以保护皮肤表面的PH值不受破坏，增加皮肤的弹性，防止皮肤干燥，起到美容护肤的作用。

2）具有消炎和杀菌的作用一定的改善作用。

7. 客户问：我还是觉得净化后的水烧开喝放心些？

答：：本来烧开水也是一种水处理的方式，这种方法仅仅只能去除水中的细菌。但我们的水已经通过滤芯的处理后，水中不含有细菌，已经可以直接饮

用。所以，根本没必要在烧开了饮用。同时，在欧美日等发达国家，都提倡饮用常温水。因为在40度以下的碱性水能更好的发挥出治疗功效，因此建议大家还是生饮碱性水更好。即使是冬天，也建议大家将碱性水烧到40度以下饮用。

8. 为什么烧开的水会有白色沉淀物？ 这不是水垢，而是钙镁离子的沉淀，无毒、无害；因为碱性水的钙镁离子更多，那是对人体有益的矿物离子，并且那是呈粉末状的，即使附着在容器上也容易被清除掉。

9.为什么酸性水管上有白色物质？

10. 你们的产品价格为什么这么贵 电解水机是高档产品，是目前市面上最高级的末端直饮水设备，普通净水器仅仅到达了安全的阶段，而电解水机更是提高到了健康阶段。同时，雅马哈品牌影响力、产品的品质保证性，也是行业顶级的。普通电解水机一般只能使用2到3年，而雅马哈的电解水机可以保证至少使用十年以上（因为我们的钛白合金电解板比一般的更厚，而非表面涂层；区别于市场上的净水器，他们只能达到直饮的效果，但不能区分开酸碱性水及净水；雅马哈电解水机是目前重庆市场唯一的一款多功能性制水机）。

11. 都说碱性水是骗人的，为什么你们还推荐购买电解水机呢？

首先，我们碱性电解水的特性为：1.碱性2.小分子团3.带还原电位。碱性只是这3中特性之一。同时，在全世界范围内，日本科学工作者是最早进行电解水机研究的，从1931年至今已有80多年历史了；并且，还成立有专门的电解

水机协会，厚生省（相当于我国卫生部）还在96年给部分产品颁发了医疗认证许可，对电解水机的有效性、品质性、安全性要求做了进一步的实验验证，并且在日本的家庭和餐馆已经得到大家的认可。

12. 如何对暂时不用的电解水进行储存？

1）建议储存时间不超过24小时；

2）建议用陶瓷或玻璃容器存放，不能用金属器皿储存。

三 : 18SDS-PAGE电泳实验步骤

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris—HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。

如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。蛋白质分子量愈小，在电场中移动得愈快；反之，愈慢。蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是：

Mr=K(10-b·m) logMr=LogK—b·Rm，

式中 Mr ——蛋白质的分子量； logK——截距； b——斜率；

Rm ——相对迁移率。

实验证明，蛋白质分子量在15,000—200,000的范围内，电泳迁移率与分子量

的对数之间呈线性关系。蛋白质的相对迁移率Rm＝蛋白质样品的迁移距离／染料(溴酚蓝)迁移距离。这样，在同一电场中进行电泳，把标准蛋白质的相对迁移率与相应的蛋白质分子量对数作图，由未知蛋白的相对迁移率可从标准曲线上求出它的分子量。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定蛋白质的分子量具有简便、快速、重 复性好的优点，是目前一般实验室常用的测定蛋白质分子量的方法。

三、试剂及主要器材 1．主要试剂 1)标准蛋白混合液

内含：兔磷酸化酶B(Mw 97,400)，牛血清蛋白(Mw 66,200)，兔肌动蛋白(Mw 43,000)，牛磷酸酐酶(Mw 31,000)和鸡蛋清溶菌酶(Mw 14,400)

2)30％凝胶贮备液：丙烯酰胺（Acr） 29.2g，亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 0.8g,加双蒸水至100mL。外包锡纸，4℃冰箱保存，30天内使用。

3)分离胶缓冲液(1.5mol／L): Tris 18.17g,加双蒸水溶解,6mol/L HCl调pH8.8,定容100mL。4℃冰箱保存

4)浓缩胶缓冲液(0.5mol／L): Tris 6.06g,加水溶解，6mol/L HCl调pH6.8，并定容到100mL。4℃冰箱保存

5)电极缓冲液(pH8.3)：SDS lg，Tris 3g，Gly 14.4g，加双蒸水溶解并定容到1000mL。4℃冰箱保存。 6)10％SDS，室温保存

7)质量浓度10％过硫酸铵(新鲜配制)

8)上样缓冲液：0.5mol／L Tris-HCl pH6.8 1.25mL，甘油2mL，10％SDS 2mL，β-巯基乙醇1mL，0.1％溴酚蓝0.5mL，加蒸馏水定溶至10mL。

9)0.25％考马斯亮蓝R-250染色液：0.25g考马斯亮蓝R250，加入91ml50%甲醇，9ml冰醋酸

10)脱色液：50ml甲醇，75ml冰醋酸与875ml双蒸水混合 11)未知分子量的蛋白质样品(1mg／mL )

2．实验器材 1) 2) 3) 4) 5)

四、实验操作 1． 装板

将密封用硅胶框放在平玻璃上，然后将凹型玻璃与平玻璃重叠，将两块玻璃立起来使底端接触桌面，用手将两块玻璃夹住放入电泳槽内，然后插入斜插板到适中程度, 即可灌胶。

DYCZ-24D垂直板电泳槽(北京市六一仪器厂) 电泳仪

长滴管及微量加样器

烧杯(250mL、500m1)、量筒(500mL、 250m1)、培养皿(15cm?l5cm) 注射器等

2． 凝胶的聚合

分离胶和浓缩胶的制备：按下表中溶液的顺序及比例，配置10％的分离胶和4.8％的浓缩胶。

按上表各液加入混匀后配制成分离胶后，将凝胶液沿凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓用滴管滴入，小心不要产生气泡。将胶液加到距短玻璃板上沿2cm处为止,约5mL。然后用细滴管或注射器仔细注入少量水,约0.5-1mL。室温放置聚合30-40min。

待分离胶聚合后，用滤纸条轻轻吸去分离胶表面的水分，按上表制备浓缩胶。用长滴管小心加到分离胶的上面，插入样品模子(梳子)；待浓缩胶聚合后，小心拔出样品模子。

3．蛋白质样品的处理

若标准蛋白质或欲分离的蛋白质样品是固体，称取lmg的样品溶解于lmL 0.5mol／L pH6.8Tris-盐酸缓冲液或蒸馏水中；若样品是液体，要测定蛋白质浓度，按1.0～1.5mg／mL溶液比例，取蛋白质样液与样品处理液等体积混匀。本实验所用样品为15～20?g的标准蛋白样品溶液，放置在0.5mL的离心管中，加入15—20?l的样品处理液。在100℃水浴中处理2min，冷却至室温后备用。

吸取未知分子量的蛋白质样品20?l，按照标准蛋白的处理方法进行处理。 4． 加样

SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳的加样方法

用手夹住两块玻璃板,上提斜插板使其松开,然后取下玻璃胶室去掉密封用硅胶框,注意在上述过程中手始终给玻璃胶室一个夹紧力,再将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽,插入斜板,将缓冲液加至内槽玻璃凹面以上,外槽缓冲液加到距平板玻璃上沿3mm处即可,注意避免在电泳槽内出现气泡。

加样时可用加样器斜靠在提手边缘的凹槽内，以准确定位加样位置，或用微量注射器依次在各样品槽内加样，各加10～15?l(含蛋白质10～15?g)，稀溶液可加20～30?l (还要根据胶的厚度灵活掌握)。 5．电泳

加样完毕，盖好上盖，连接电泳仪，打开电泳仪开关后，样品进胶前电流控制在15～20mA，大约15～20min；样品中的溴酚蓝指示剂到达分离胶之后，电流升到30～45mA，电泳过程保持电流稳定。当溴酚蓝指示剂迁移到距前沿1～2cm处即停止电泳，约1-2小时。如室温高，打开电泳槽循环水，降低电泳温度。 6．染色、脱色

电泳结束后，关掉电源，取出玻璃板，在长短两块玻璃板下角空隙内，用刀轻

轻撬动，即将胶面与一块玻璃板分开，然后轻轻将胶片托起，指示剂区带中心插入铜丝作为标志，放入大培养皿中染色，使用0.25％的考马斯亮蓝染液，染色2～4h，必要时可过夜。

弃去染色液，用蒸馏水把胶面漂洗几次，然后加入脱色液，进行扩散脱色，经常换脱色液，直至蛋白质带清晰为止。 7．结果处理

1)测量脱色后凝胶板的长度和每个蛋白质样品移动距离(即蛋白质带中心到加样孔的距离)，测量指示染料迁移的距离。

2)按以下公式计算蛋白质样品的相对迁移率(Rm)

相对迁移率＝样品迁移距离(cm)／染料迁移距离(cm)

3)标准曲线的制作：以各标准蛋白质相对迁移率为横坐标，蛋白质分子量的对数为 纵坐标在半对数坐标纸上做图，得到一条标准曲线。

4)测定蛋白质样品的分子量：根据待测蛋白质样品的相对迁移率，从标准曲线上查得该蛋白质的分子量。

五、思考题

1． 聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳的几个不连续性是什么？ 2． 电泳时的三个物理效应是什么？是怎样造成的？ 3． 电泳后上下槽缓冲液可否混合后再使用？为什么？ 4． 上样缓冲液中加入甘油的作用是什么？ 5． 贮液配制及贮存应注意什么？

6．过硫酸铵、7%乙酸和考马斯亮蓝在实验中有什么作用？

附：不同分离胶的配制方法 分离胶的浓度 双蒸水/ml 1.5mol/L Tris-Hcl(pH8.8)/ml 10%SDS/ml 凝胶储备液（Acr/Bis）/ml 10%过硫酸铵/ul TEMED/ul 总体积/ml

20% 0.75 2.5 0.1 6.6 50 5 10

15% 2.35 2.5 0.1 5.0 50 5 10

12% 3.35 2.5 0.1 4.0 50 5 10

10% 4.05 2.5 0.1 3.3 50 5 10

7.5% 4.85 2.5 0.1 2.5 50 5 10

四 : 介绍电解水机标准用语及实验步骤

介绍电解水机标准用语

1. 营业员五指并拢，指向电解水机机头说：

这是日本原装进口的雅马哈电解水机，在日本已经有20多年的销售历史，目前大约70%的家庭都会用到这样的电解水机；日本更是世界上对碱性水研究时间最长的国家，已经超过40年。(www.61k.com］

客户问：什么是电解水机？ 电解水机就是将净化后的水，通过电解的方式，进行了更高级的处理，将水细分为碱性水、酸性水、净水等多种功能性用水。 雅马哈碱性水不仅是干净、好喝的水，而且能改善身体体质，增加人体免疫力，长期饮用对各种疾病有一定疗效。

2. 客户问：为什么会有这些功能？

营业员说：老师，耽误你2、3分钟时间，我可以边做实验边讲解，您就更清楚碱性水给您带来的好处了！

电解水机实验步骤介绍

碱性水机 介绍电解水机标准用语及实验步骤

实验目的: 水经过电解后，有正极必有负极，因此有酸性必有碱性；水中的钙、镁、钠、钾等正离子被阴极吸收，氢氧根离子增加而形成碱性，这样就可以中和人体内的酸毒，改善酸性体质。(www.61k.com）其中酒精呈酸性，喝碱性水可以中和人体内的酸根离子，从而达到身体酸碱度平衡。这也是为什么人们说喝碱性水好的真正原因。

实验目的：一般的水约为13到16个分子团，经电解后水分子团约为5到6个，因为矿物质已被离子化，所以水的渗透力和溶解力更强，人体容易吸收，更能有效清除细胞及血液中的油脂及其他废旧物质，从而促进新陈代谢。

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实验目的：碱性水具有负250MV以下的氧化还原电位，能迅速清除人体内多余自由基（活性氧），中和酸毒，清除人体致病因子。(www.61k.com]自来水不具有细小分子团和还原电位的特点；对身体没有任何改善作用。其中碱性水中含氧量高，活性氧量大，是有益身体的健康好水（每升约5毫克氧）。

实验目的：证明料理用碱性水是小分子团、抽出能力及溶解力更强。并且能够更好的提取出茶叶中的精华。同理，这也是为什么用碱性水煮米饭能够使米饭更有嚼劲，颗粒更饱满的原因。

3. 料理用水有什么用处？

1）对饮食有益的水：其实，它就是子团水，能在烹调食物的时候起到提味的作用，煲汤也可不放味精；同时，它还有良好的冲泡作用，可使茶和咖啡的口感更好；用它煮出来的米饭，更加蓬

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松可口；蔬菜瓜果在碱性水中浸泡30分钟以上，可祛除残留农药（因为农药呈酸性，酸碱可中和达到祛除农药的作用），并且浸泡后的食物更新鲜不易被腐坏；

2）对肠胃好的水多、胃溃疡有一定的疗效；在日本以上碱性水功能已经过临床证明；

3）对身体好的水痛风、动脉硬化等。（www.61k.com）

4. 饮用水有什么好处

它是PH值7.5到8.5之间的弱碱性水，建议大家从弱碱性水开始使用，以适应肠道反应。并且在做米饭的时候，加入此水，能让煮出来的米饭，颗粒饱满，香甜可口。

5. 净化水有什么好处

中性净水，是去除了水中有害物质的安全直饮水，建议用作服药和冲泡牛奶时使用。

6. 酸性水有什么好处

1）对美容好的水人体的皮肤表面PH值呈弱酸性，用酸性水洗脸，可以保护皮肤表面的PH值不受破坏，增加皮肤的弹性，防止皮肤干燥，起到美容护肤的作用。

2）具有消炎和杀菌的作用一定的改善作用。

7. 客户问：我还是觉得净化后的水烧开喝放心些？

答：：本来烧开水也是一种水处理的方式，这种方法仅仅只能去除水中的细菌。但我们的水已经通过滤芯的处理后，水中不含有细菌，已经可以直接饮

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用。［www.61k.com）所以，根本没必要在烧开了饮用。同时，在欧美日等发达国家，都提倡饮用常温水。因为在40度以下的碱性水能更好的发挥出治疗功效，因此建议大家还是生饮碱性水更好。即使是冬天，也建议大家将碱性水烧到40度以下饮用。

8. 为什么烧开的水会有白色沉淀物？ 这不是水垢，而是钙镁离子的沉淀，无毒、无害；因为碱性水的钙镁离子更多，那是对人体有益的矿物离子，并且那是呈粉末状的，即使附着在容器上也容易被清除掉。

9.为什么酸性水管上有白色物质？

10. 你们的产品价格为什么这么贵 电解水机是高档产品，是目前市面上最高级的末端直饮水设备，普通净水器仅仅到达了安全的阶段，而电解水机更是提高到了健康阶段。同时，雅马哈品牌影响力、产品的品质保证性，也是行业顶级的。普通电解水机一般只能使用2到3年，而雅马哈的电解水机可以保证至少使用十年以上（因为我们的钛白合金电解板比一般的更厚，而非表面涂层；区别于市场上的净水器，他们只能达到直饮的效果，但不能区分开酸碱性水及净水；雅马哈电解水机是目前重庆市场唯一的一款多功能性制水机）。

11. 都说碱性水是骗人的，为什么你们还推荐购买电解水机呢？

首先，我们碱性电解水的特性为：1.碱性2.小分子团3.带还原电位。碱性只是这3中特性之一。同时，在全世界范围内，日本科学工作者是最早进行电解水机研究的，从1931年至今已有80多年历史了；并且，还成立有专门的电解

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水机协会，厚生省（相当于我国卫生部）还在96年给部分产品颁发了医疗认证许可，对电解水机的有效性、品质性、安全性要求做了进一步的实验验证，并且在日本的家庭和餐馆已经得到大家的认可。[www.61k.com)

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12. 如何对暂时不用的电解水进行储存？

1）建议储存时间不超过24小时；

2）建议用陶瓷或玻璃容器存放，不能用金属器皿储存。

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本文标题：itraq实验步骤-MTT实验操作步骤
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