一 : 阅读量上不去？想想如何提高你的文章转发率吧！

来源：西瓜君(ID：qiaoqiaohuli)

作者：夏伴生

公众号之所以能成为目前最为主流的内容创业平台以及新闻事件的发声地，很大一部分原因就是借助目前移动端的信息传播模式，也就是微信和朋友圈。那么，用户通常都喜欢在自己的朋友圈上转发什么样的内容呢?运营者要是能搞懂这个问题，文章的转发与阅读数也许就会大幅提升。

在碎片化的阅读时代，大部分的读者都是没有耐心的，喜欢看短而精的内容，能把文章认认真真地看完已经很不错了，更不要说去转发分享。

然而有这么一个公众号，他们的文章几乎篇篇都是 3000 字以上的长文，甚至还达到过公众号文章内容的 2 万字上限，可却依旧能保持着相当高的转发率，平均阅读量突破 10 万+。公众号「大象公会」的创始人黄章晋对此有自己的一套看法。

通常情况下，大多数能看到我们朋友圈的，都是我们的家人、同学、同事、朋友。因此，发送什么样的内容是对大部分人都有所帮助的呢?无非两个方面，身体上的和心灵上的。

对身体好的就是健康、养生、疾病预防、安全隐患之类的文章，这也是为什么包括我们的父母在内的中老年组特别热衷转发的原因。所以当长辈们转发这类文章时，不用显得不耐烦，这只不过是他们的一种需求罢了。而心灵上的说白了就是鸡汤。比如成功励志学、疗伤情感故事等等。

不知道大家有没这样的感受，人们往往对负面新闻的关注是多于正面新闻的。这个问题可以从心理学上找到答案。人在遇到危险的时候，心跳会加速，注意力会更加集中，因此负面新闻带来的不安全感、紧张感会让人更加敏感、专注。而现如今，人们对食品安全、公共安全、司法腐败等等恰恰是我们感受最强烈的危害，这也能解释为什么《人民的名义》这样的防腐大剧能在当下引起这么强烈的共鸣。

通常这几类信息是人脑首先认定的重要信息：令人恐惧的、令人激动的、令人新奇的以及令人困惑的。在了解读者的需求和关注点之后，就可以开始找选题方向了，那么什么样的内容更具有传播性呢?

较低传播度

熟悉的概念出现在熟悉的情景里

举例：《新闻联播》

中等传播度

陌生的概念出现在陌生的情景里

举例：《一款号称能超越苹果的手机将在所罗门群岛诞生》。大家愿意转发完全陌生的新鲜事物可以凸显自己的见多识广和高逼格。

较高传播度

陌生的概念出现在熟悉的情景里

微信编辑器 构思编辑器

举例：《原来孙悟空有个爸爸》。这类文章可以借助反差引发读者强烈的好奇。

超高传播度

熟悉的概念出现在陌生的情景里

举例：《林丹，你是世界第一却输给了一个小》、《男子虎园过夜毫发未损》。类似明星出轨、高官落马都属于这类范畴，曾经光芒万丈如今成了负面新闻，或是相反的《路边乞讨一顿饭后竟成富二代?》。

除了选题方向上的把握，还有一个技巧可以帮助提高文章的转发率：不断设置悬念，增加阅读奖赏。

一般一篇几千字的长文要想全部读完是很考验耐心的，这就要求文章的情节需要紧紧抓住用户的关注，就像电视剧的结尾总让人想去探究后面究竟会发生什么一样，通过反复的设置悬念再解答悬念，一步步牵着读者往下走。

设置阅读奖赏，阅读奖赏最常见的就是幽默搞笑的段子、意味深长的金句、对所有疑问的解答、在结局处的转折等等，带有戏剧冲突，感觉拨云见日。通常阅读奖赏所带来的快感只有3- 5 秒，要在这几秒钟的时间内让读者心满意足的按下转发键，就要把最高的阅读奖赏放在文章的最后，这样才能有更多的转发。这就是为什么许多标题党的文章中只有一个字的内容，但是转发率却很高的原因。

相反的，如果把阅读奖赏放在开头，转发就会变少。总之一句话，就是要让读者在最兴奋的时候结束文章，这样转发率才是最高的。

即便公众号的粉丝基数不多，如果能想办法提高文章的转发率，形成病毒式传播，也足以让账号的吸粉能力得到快速的提升。读者转发公众号所发的文章不仅能代表他赞同作者的观点，也能看出他的品味与腔调。而现如今，单纯的靠一篇文章的情感共鸣已经不能够为公众号带来持续的关注，只有上升为价值观的共鸣才能够实实在在的留住你的粉丝。

二 : 如何阅读质粒图谱

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如何阅读质粒图谱 如 何 阅 读 质 粒 图

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒?DNA?是一种新的非病毒转基因载体。

一、一个合格质粒的组成要素

复制起始位点?Oril?即控制复制起始的位点。原核生物?DNA?分子中只有一个复制起始 点。而真核生物?DNA分子有多个复制起始位点。

＃抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如?Amp+l?,Kan+?

＃多克隆位点?MCS?克隆携带外源基因片段?l?

＃P/E?启动子/增强子?l?

＃Termsl?终止信号

＃加?poly（A）信号?l?可以起到稳定?mRNA作用

二、如何阅读质粒图谱

第一步：首先看?Ori?的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。

（1）Ampr?水解?β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。

（2）tetr?可以阻止四环素进入细胞。

（3）camr?生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。

（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶使?G418（长那霉素衍生物）失活

（5）hygr?使潮霉素?β失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定 能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步： 再看外源?DNA插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于?10Kb的外源?DNA片段。 一般来说，外源?DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信 号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即 成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。

启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号

＃启动子－促进?DNA转录的?DNA顺序， 这个?DNA?区域常在基因或操纵子编码顺序的 上游，是?DNA分子上可以与?RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本 身不被转录。l?

＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因 转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或 下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。l?

＃核糖体结合位点/起始密码/SD?序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA?有核糖体的两个结合位 点，对于原核而言是?AUG（起始密码）和?SD序列。l?

＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个?AATAAA?的保守序列，此位点?down－stream?有一段?GT?或?T?富丰区，这?2?部分共同 构成?poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个?AATAAA?的保守序列， 此位点?down－stream有一段?GT或?T富丰区，这?2部分共同构成?poly（A）加尾信号。?l?回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针， 那其实是代表两条?DNA链，即质粒是环状双链?DNA，它的启动子等在其中一条链上， 而它的抗性基因在另一条链上.?

三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写）?

1.?什么是载体

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即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细 胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工 具就叫做载体（vector）。?

P.S.基因工程所用的?vector?实际上是?DNA?分子，是用来携带目的基因片段进入受体细 胞的?DNA?

2.?载体的分类

＃按功能分成：

（1）克隆载体都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它 是用来克隆和扩增?DNA?片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注 意是不是使用的严谨行载体）

（2）表达载体具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs?等）还具有转录/翻译所必需的?DNA?顺序的载体。

＃按进入受体细胞类型分：（1）原核载体 （2）真核载体（3）穿梭载体（sbuttle?vector） 指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之 间）.?

P.S.?穿梭质粒含原核和真核生物?2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。?

3.?基因工程载体的?3个特点：

（一）都能独立自主的复制：载体?DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域， 如?MCS，插在其中的外源?DNA?片段，能被动的跟着载体一起复制/扩增，就像载体的 正常成分一样。

（二）都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因，多是抗生素抗性基因，将受体细 胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时， 只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细 胞才能存活。

（三）都能容易进入宿主细胞中去，也易从宿主细胞中分离纯化出来。?

4.?载体的选择和制备：选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的 限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述?3点：

【1】构建?DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

【2】.载体的类型：

－－－（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb?选质 粒。

－－－（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。 －－－（3）对原核表达载体应该注意?3点：

－－－－－－①选择合适的启动子及相应的受体菌；

－－－－－－②用于表达真核蛋白质时注意克服?4个困难和阅读框错位；

－－－－－－③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。

【3】载体?MCS?中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易 于链接，不产生阅读框架错位。

选用质粒（最常用）做载体的?4点要求：

①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也 有大载体）；

②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般?10?个以上的拷贝，而严谨型质粒?<10?个。

③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；

④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位?Ampr（试一试）。

无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体?DNA进行生物秀论坛——资源共享、学术交流、互助社区?http://www.61k.combbs/?

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质粒载体 质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或 细胞共生的遗传成分。其特点如下：

① 是染色质外的双链共价闭合环形?DNA?（?covalently?closed?circuar?DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在?2-300kb之间，＜15kb?的小 质粒比较容易分离纯化，＞15kb?的大质粒则不易提取。

②能自主复制，是能独立复制的复制子（autonomous?replicon）。一般质粒?DNA?复制的质粒可随宿主细胞分裂而传给后代。按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类：严 紧控制（stringent?control）型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联，拷贝数较少，每个细胞 中只有?1个到十几个拷贝；另一类是松弛控制（relaxed?control）型质粒，其复制宿主 不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒?DNA上都有复制的起点，只有?ori?能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制， 不同质粒复制控制状况主 要与复制起点的序列结构相关。有的质粒的可以整合到宿主细胞染色质?DNA?中，随宿 主?DNA复制，称为附加体，例如细菌的性质粒就是一种附加体，它可以质粒形式存在， 也能整合入细菌的?DNA，又能从细菌染色质?DNA?上切下来。F因子携带基因编码的蛋 白质能使两个细菌间形成纤毛状细管连接的接合（conjugation），通过这细管遗传物质 可在两个细菌间传递。

③质粒对宿主生存并不是必需的。这点不同于线粒体，线粒体?DNA?也是环状双 链分子，也有独立复制的调控，但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的 一部分， 质粒也往往有其表型， 其表现不是宿主生存所必需的， 但也不妨碍宿主的生存。 某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存，例如，细菌中许多天然的 质粒带有抗药性基因， 如编码合成能分解破坏四环素、 氯霉素、 氨芐表霉素等的酶基因， 这种质粒称为抗药性质粒，又称?R?质粒，带有?R?质粒的细菌就能在相应的抗生素存在 生存繁殖。所以质粒对宿主不是寄生的，而是共生的。

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三 : 如何阅读质粒图谱

一、载体主有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。

一、一个合格质粒的组成要素

复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。

抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+，Kan+

多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段

P/E：启动子/增强子

Terms：终止信号

加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用

二、如何阅读质粒图谱

第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）

Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记：

（1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。

（2）tetr：可以阻止四环素进入细胞。

（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。

（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。

（5）hygr：使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。

相关概念：

启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号

启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。

增强子/沉默子－为真核l基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。

核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。

l转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。

三、载体及其分类

载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。

P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。

载体的分类

按功能分成：（1）克隆载体：都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）（2）表达载体：具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
按进入受体细胞类型分：（1）原核载体（2）真核载体（3）穿梭载体（sbuttlevector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之间）。P.S.穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。

基因工程载体的3个特点：

（一）都能独立自主的复制：载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，如MCS，插在其中的外源DNA片段，能被动的跟着载体一起复制/扩增，就像载体的正常成分一样。

（二）都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因，多是抗生素抗性基因，将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时，只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活。

（三）都能容易进入宿主细胞中去，也易从宿主细胞中分离纯化出来。

四、载体的选择和制备

选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。

载体选择主要考虑下述3点：

1、构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

2、载体的类型：

（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。

（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。

（3）对原核表达载体应该注意3点：

①选择合适的启动子及相应的受体菌；

②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；

③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。

3、载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。选用质粒（最常用）做载体的4点要求：

①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多

（也有大载体）；

②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型

质粒<10个。

③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；

④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。

无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。

二、pET32a(+)自身载体表达的片段大小

The expected fusion protein expressedencoded by just the pET-32a(+) vector alone would be around 20.4kDa. The Trx-tag by itself would contribute 12kDa. The rest is dueto the two His-tags (0.8kDa each) and the S-tag (1.7kDa). Theremaining 5.1kDa is due to the intervening（?）54amino acids between the tags and until the stopcodon.

三、pET32系列载体的载体序列地址

pET-32a(+) Vector Sequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer... ET/pET-32a_seq.html
pET-32b(+)VectorSequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer... ET/pET-32b_seq.html
pET-32c(+) VectorSequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer... ET/pET-32c_seq.html

四、pET系列载体阅读方法

ori是复制起始点，细的黑箭头是几个不同的转录区，其箭头方向不同，说明每个表达产物（如kan抗性基因、LacI等）都有独立的promoter，有时与T7 promoter方向相反。粗的黑箭头是MCS，用于目的基因的插入，箭头方向表明目的基因的转录方向，它的转录方向可以与其它几个不同的转录区相同，也可以不同，如Kan抗性基因、LacI的方向是一样的，可能与调控相关，不同的载体是不一样的。一个载体可只看它的启动子到终止子那一段，其它的可以考虑少些。

五、pET表达菌株的相关信息

（DE3）指宿主为λDE3溶原菌，其染色体上带有一拷贝由lacUV5启动子控制的T7RNA聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到pET载体的目标基因生产蛋白。命名为pLysS和pLysE的宿主菌带有编码T7溶菌酶（为T7RNA聚合酶的天然抑制物）的pET相容性质粒。带有pLysS的细胞产生少量溶菌酶，而pLysE宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制T7RNA聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的pET重组体。带有pLacI的宿主菌产生额外的抑制pETBlue和pTriEx载体基础表达的lac阻遏蛋白。λDE3溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。
AD494菌株为硫氧还蛋白还原酶( trxB)突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。TrxB突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记bla的质粒。
B834为BL21的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型，可用35S-甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，从而用于结晶学研究。
BL21应用最广的宿主菌来源，具有lon和ompT蛋白酶缺陷的优点。
BL21TrxB菌株在蛋白酶缺陷BL21背景上具有与AD494菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变( trxB)。由于trxB宿主有利于胞浆内二硫键形成，它们的使用可增加正确折迭的蛋白组分。TrxB突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记bla的质粒。
BLR为BL21的recA-衍生菌株，能够改善质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列或其产物能够引起DE3噬菌体丢失的目标质粒。
HMS174菌株在K-12背景上提供了recA突变。与BLR一样，这些菌株能够稳定其产物能够引起DE3噬菌体丢失的某些目标基因。
NovaBlue适合用作初始克隆宿主菌的K-12菌株，具有高转化效率、蓝/白斑筛选能力（与合适质粒）和导致优质质粒DNA高产的recAendA突变。由于存在F附加体编码的lacIq阻遏蛋白，NovaBlue的DE3溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。
Origami为K-12衍生的宿主菌，硫氧还蛋白还原酶突变( trxB)和谷胱甘肽还原酶( gor)基因均为突变，能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似，Origami（DE3）表达的活性蛋白比其它宿主菌高10倍以上。Origami宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于pET-32载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。TrxB和gor突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记bla的pET质粒。
OrigamiB宿主菌来源于BL21lacZY突变株，还带有与原始Origami菌株相同的TrxB /gor突变。OrigamiB菌株集BL21、Tuner和Origami宿主菌的优点于一体。TrxB和gor突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记bla的pET质粒。
Rosetta宿主菌从BL21衍生而来，可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子AUA、AGG、AGA、CUA、CCC和GGA的tRNAs。这样Rosetta菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。tRNA基因由它们的天然启动子驱动。在Rosetta（DE3）pLysS和Rosetta（DE3）pLacI中，稀有tRNA基因存在于分别带有T7溶菌酶和lac阻遏基因的同一质粒上。
Tuner菌株为BL21的lacZY缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。lac通透酶（lacY）突变使得IPTG均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整IPTG浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常与pET载体相关）。低水平表达有时可能增强难表达蛋白的溶解性和活性。Tuner（DE3）pLacI菌株与pETBlue和pTriEx载体的表达相容。

六、pGEX载体的特点

pGEX特点就是带有GST标签，可以增加目的蛋白的溶解度，别的没什么特点，属于大众型载体，目前也较常使用。

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