一 : 安捷伦液相色谱柱常用系列及其价格
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安捷伦液相色谱柱常用系列及其价格
适合小分子化合物分离的液相色谱柱
1)Poroshell120色谱柱
?高柱效、高分离度,柱反压相当于亚2μm柱的50%
?2μm筛板,对复杂基质的样品仍具有稳定的高性能能
?与400bar和600bar的HPLC以及UHPLC兼容
?其键合相的扩展系列与ZORBAX系列色谱柱的相对应,能可靠地进行方法转换
?具有良好选择性和峰形
?具有优异的重现性
安捷伦Poroshell120柱粒径为2.7μm,由1.7μm直径的实心核和0.5μm厚的多孔外层构成。这种小粒径填料具有与亚2微米柱类似的高柱效,但柱反压低40-50%。这种高柱效、高分离度色谱柱可以用于任何类型的液相色谱。多孔层和实心核限制了扩散距离,提高了分离速度,而窄粒径分布提高了柱效和分离度。该柱支持高压,可以采用多柱串联实现最高的分离度和柱效。Poroshell300柱采用了同样的原理,非常适用于生物分子的快速、高分离度分离。
“www.61k.com”键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
EC-C18 | 120A | 60℃ | 2.0-8.0 | 双封端 | 10% | 130m2/g |
EC-C8 | 120A | 60℃ | 2.0-8.0 | 双封端 | 5% | 130m2/g |
Phenyl-Hexyl | 120A | 60℃ | 2.0-8.0 | 双封端 | 9% | 130m2/g |
SB-C18 | 120A | 90℃ | 1.0-8.0 | 无 | 8% | 130m2/g |
SB-C8 | 120A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 5.5% | 130m2/g |
SB-Aq | 120A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 专利 | 130m2/g |
Bonus-RP | 120A | 60℃ | 2.0-9.0 | 三重封端 | 9.5% | 130m2/g |
EC-CN | 120A | 60℃ | 2.0-8.0 | 双封端 | 3.5% | 130m2/g |
HILIC | 120A | 60℃ | 0.0-8.0 | 无 | 无 | 130m2/g |
Poroshell120)(最大压力:600bar)
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
EC-C18 | 695975-902 | 100mm | 4.6mm | 2.7um | 6195.85元 |
693775-902 | 150mm | 2.1mm | 2.7um | 7046.67元 | |
EC-C8 | 693975-906 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
699975-306 | 50mm | 3.0mm | 2.7um | 5064.22元 | |
Phenyl-Hexyl | 699975-912 | 50mm | 4.6mm | 2.7um | 5064.22元 |
SB-C18 | 683975-902 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
683975-302 | 150mm | 3.0mm | 2.7um | 7046.67元 | |
SB-Aq | 685975-914 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 6195.85元 |
Bonus-RP | 693968-901 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
EC-CN | 693975-905 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
HILIC | 693975-901 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
SB-C8 | 683975-906 | 150mm | 4.6mm | 2.7um | 7046.67元 |
689775-906 | 50mm | 2.1mm | 2.7um | 5064.22 |
2)ZORBAX超高压快速高分离度(RRHD)1.8μm柱
?耐高压(1200bar)柱在1290Infinity液相色谱仪或其它超高压快速液相色谱仪获得最佳结果
?1.8μm填料为大多数分离提供了最高分离度
?现提供12种ZORBAX键合相,包括提供出色峰形的EclipsePlusC18、低pH下稳定的ZORBAXStableBondC18、以及Bonus-RP、EclipsePAH、EclipsePlusPhenyl-Hexyl和Extend-C18
?同时提供HILICPlus柱
?与具有相同键合相的ZORBAX3.5μm和5μm柱具有相同的选择性,且与任何液相色谱仪兼容ZORBAX超高压快速高分离度(RRHD)柱是ZORBAX1.8μm填料系列色谱柱的扩展。新的RRHD柱采用改良的填充工艺,在安捷伦1290InfinityLC或其它UHPLC仪器上使用时,在1200bar压力下仍能保持稳定。RRHD1.8μm柱有几种规格,50、100和150mm柱长,用于对最复杂样品进行快速或高分离度分离——实现真正的高分辨。
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXEclipsePlusC18 | 95A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 160m2/g | |
ZORBAXEclipsePlusC8 | 95A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 160m2/g | |
ZORBAXEclipsePlusPhenyl-Hexyl | 95A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 160m2/g | |
ZORBAXEclipsePAH | 95A | 60℃ | 2.0-8.0 | 无 | 14% | 180m2/g |
ZORBAXHILICPlus | 95A | 60℃ | 0.0-8.0 | 无 | 180m2/g | |
ZORBAXStableBond300SB-C8 | 300A | 80℃ | 1.0-8.0* | 无 | 45m2/g | |
ZORBAXStableBond300SB-C18 | 300A | 80℃ | 1.0-8.0* | 无 | 45m2/g | |
ZORBAXStableBond300SB-C3 | 300A | 80℃ | 1.0-8.0* | 无 | 45m2/g | |
ZORBAX300-Diphenyl | 300A | 80℃ | 1.0-8.0* | 封端 | 45m2/g |
备注:*StableBond柱最适合在低pH条件下使用。在pH>6时,所有硅胶色谱柱在<40°C和低浓度缓冲液(范围10-20mM)条件下可获得最高的柱稳定性。300SB-C18可以在高达90°C条件下使用。如果pH6-8,可选择EclipsePlusC18柱
**在pH8以下时温度限为60°C,pH8-11.5时温度限为40°C
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
ZORBAXEclipse Plusc18 | 959993-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5693.22元 |
695975-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 5104.94元 | |
959963-302 | 150mm | 3.0mm | 3.5um | 5693.22元 | |
959759-902 | 150mm | 2.1mm | 1.8um | 7594.23元 | |
ZORBAXEclipsePlusC8 | 959990-906 | 150mm | 4.6mm | 5um | 7046.67元 |
959993-906 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5064.22元 | |
ZORBAXEclipsePlusPhenyl-Hexyl | 699975-912 | 150mm | 4.6mm | 3.5um | 5693.22元 |
ZORBAXEclipse 多环芳烃 | 959990-918 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5420.84元 |
959943-918 | 50mm | 4.6mm | 3.5um | 3592.83元 |
3)ZORBAXEclipseXDB
?有四种选择性可用于方法开发优化
?对碱性、酸性和中性化合物都有极佳的峰形
?在宽pH范围(pH2-9)内的高性能
?填料粒径范围从1.8μm到7μm
?超密键合和双封端使寿命延长
AgilentZORBAXEclipseXDB色谱柱(C18、C8、苯基和氰基)提供四种键合固定相,用于方法开发优化。这些色谱柱可在宽pH范围(pH2-9)内提供良好的峰形,用一系列色谱柱可灵活开发其他方法。EclipseXDB色谱柱可以在低pH(2-3)条件下用于方法开发,且同样的色谱柱还可以在中等pH(6-8)范围内进行方法开发。在中等pH范围内,残留硅醇基活性更大,且更容易造成拖尾的相互作用。为了克服这些相互作用,EclipseXDB色谱柱通过专利工艺进行超密键合和双封端,以覆盖尽可能多的活性硅醇基。最终碱性化合物在pH2-9范围内具有出色的峰形。可提供粒径为1.8、3.5、5和7μm的EclipseXDB色谱柱,实现高速、高分离度、分析和制备分离。
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXEclipseXDB-C18 | 80A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 10% | 180m2/g |
ZORBAXEclipseXDB-C8 | 80A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 7.6% | 180m2/g |
ZORBAXEclipseXDB-Pheny | 80A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 7.2% | 180m2/g |
ZORBAXEclipseXDB-CN | 80A | 60℃ | 2.0-9.0 | 双封端 | 4.3% | 180m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值
*EclipseXDB色谱柱在较宽的pH范围内有良好的稳定性。所有硅胶基色谱柱在pH6-9条件下,<40°C和低缓冲液浓度范围0.01-0.02M内操作,可获得最高的柱稳定
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
ZORBAXEclipseXDB-C18 | 990967-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
993967-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 | |
961967-902 | 100mm | 4.6mm | 3.5um | 4895.74元 | |
927975-902 | 50mm | 4.6mm | 1.8um | 5124.6元 | |
ZORBAXEclipseXDB-C8 | 993967-906 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 |
990967-906 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 | |
ZORBAXEclipseXDB-Pheny | 993967-912 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 |
ZORBAXEclipseXDB-CN | 990967-905 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
993967-905 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 |
4)ZORBAX80AStableBond
?低pH范围(最低到pH1)分离时具有最长的柱寿命和最好的重现性
?专利的稳定色谱柱固定相允许其在高温、低pH条件下使用而不发生降解
?六种不同的键合相提供了广泛的选择性——SB-C18、SB-C8、SB-CN、SB-Phenyl、SB-C3和SB-Aq
?高纯度(B型)硅胶保证了良好的峰形安捷伦ZORBAXStableBond色谱柱使用专利的、独特的、单官能团硅烷,其具有较大的二异丁基(SB-C18)或二异丙基(SB-C8、SB-C3、SB-Phenyl、SB-CN和SB-Aq)侧链基团,空间位阻关键的硅氧烷键合到硅胶表面,以避免在低pH条件下水解破坏。为了在酸性流动相条件下提供良好的稳定性并使寿命最长,重现性最佳,StableBond填料不封端。高纯度、低酸度的硅胶为酸性、碱性和中性化合物提供了出色的峰形,因此使得StableBond色谱柱成为低pH方法开发的首选。ZORBAXStableBond色谱柱可与所有常用流动相兼容,包括水含量很高的流动相。
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXSB-C18 | 80A | 80℃ | 0.0-8.0 | 无 | 10% | 180m2/g |
ZORBAXSB-C8 | 80A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 5.5% | 180m2/g |
ZORBAXSB-C3 | 80A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 4% | 180m2/g |
ZORBAXSB-CN | 80A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 4% | 180m2/g |
ZORBAXSB-Phenyl | 80A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 5.5% | 180m2/g |
ZORBAXSB-Aq | 80A | 80℃ | 1.0-8.0 | 无 | 专利 | 180m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值*StableBond柱最适合在低pH条件下使用。所有硅胶基色谱柱在pH6-8条件下,采用<40°C的柱温和较低的缓冲液浓度(0.01-0.02M)操作,可获得最高的柱稳定性。在中等pH范围内,建议使用EclipsePlus、EclipseXDB和Bonus-RP色谱柱
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
ZORBAXSB-C18 | 880975-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
883975-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 | |
ZORBAXSB-C8 | 880975-906 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 |
883975-906 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 | |
ZORBAXSB-C3 | 880975-909 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
883975-909 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 | |
ZORBAXSB-CN | 883975-905 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
880975-905 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 | |
ZORBAXSB-Phenyl | 880975-912 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
883975-912 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 | |
ZORBAXSB-Aq | 880975-914 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5465.77元 |
883975-914 | 150mm | 4.6mm | 5um | 4994.02元 |
5)ZORBAXRx
?推荐为低pH条件下EclipsePlusC18、EclipseXDB-C18和StableBondSB-C18选择性替代柱;较高温度的应用,推荐使用StableBond
?碳载量比SB-C18柱高(12%与10%)
?高稳定性和良好峰形,适用于低pH应用(最高pH8)
?经二甲基十八烷基硅烷化,未封端
?ZORBAXRx-C8与SB-C8产品相同
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXRx-C18 | 80A | 60℃ | 2.0-8.0 | 无 | 12% | 180m2/g |
ZORBAXRx-C8 | 80A | 60℃ | 1.0-8.0 | 无 | 5.5% | 180m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值
pH为6-9时,所有硅胶基色谱柱在<40°C和低浓度缓冲液(范围0.01-0.02M)条件下可获得最高的柱稳定性
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
ZORBAXRx-C18 | 883967-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 5130.21元 |
880967-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5616元 | |
ZORBAXRx-C8 | 883967-901 | 150mm | 4.6mm | 5um | 5130.21元 |
880967-901 | 250mm | 4.6mm | 5um | 5616元 |
6)ZORBAX80AExtend-C18
?在高pH(高达pH11.5)条件下,柱效高且寿命长
?独特的双配位键合和双封端提供了高pH稳定性
?比聚合物基色谱柱具有更高的柱效和更好的峰形
?改善了碱性化合物的保留、分离度及峰形
?LC/MS分离多肽的高灵敏度
安捷伦ZORBAXExtend-C18色谱柱使用创新性的双配位C18-C18键合技术,使得在高pH条件下使用硅胶基色谱柱开发高分离度分离成为可能。在高pH条件下,未带电的碱性化合物将不与下面的硅胶相互作用。实现了具有出色峰形的高效分离,并且改善了分离度。高pH分离对于在高pH溶液中更稳定或更易溶解的化合物的分离也是最佳选择。适用于高pH条件的流动相缓冲液包括三乙胺、呲咯烷、氨基乙酸、硼酸盐和氢氧化铵。氢氧化铵在pH10.5时,对于多肽和小分子LC/MS分析是非常好的流动相改性剂,与含三氟乙酸的低pH的流动相相比具有更高的灵敏度。Extend-C18色谱柱在pH2-11.5范围内是稳定的,且对于所有类型化合物都具有良好的峰形。Extend-C18色谱柱在低pH条件下还可以提供其他选择性。
键合相 | 孔径 | 温度限 61阅读/ www.61k.net | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXExtend-C18 | 80A | 60℃ | 2.0-11.5 | 双封端 | 12.5% | 180m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值
*温度上限在pH8以下时为60°C,pH8-11.5时为40°C
**所有硅胶基质色谱柱在pH6以上,采用40°C以下的柱温和低浓度缓冲液(0.01-0.02M)或有机缓冲液操作,可获得最高的柱稳定性
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
ZORBAXExtend-C18 | 773450-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 5616元 |
770450-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 6097.57元 |
7)ZORBAXBonus-RP
?在低pH和中等pH条件下,对于难分离的碱性化合物具有出色的峰形
?独特的反相选择性
?使用嵌入极性基团和空间位阻的创新性键合技术
?在100%水相流动相中可用安捷伦ZORBAXBonus-RP色谱柱包含在长烷基链中嵌入的极性酰胺基团。此创新性键合减少了碱性化合物和硅胶基质之间的相互作用,改善了最难分离的碱性化合物的峰形。通过三封端进一步改善了峰形,并延长了色谱柱寿命。此外,二异丙基侧基提供了空间位阻以防止酸性水解,延长了在低pH条件下的寿命。Bonus-RP色谱柱提供了不同于C18和C8烷基键合固定相的选择性。
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
ZORBAXBonus-RP | 80A | 60℃ | 2.0-9.0 | 三封端 | 9.5% | 180m2/g |
8)Pursuit液相柱
在药物开发和药物代谢初期,Pursuit柱是分析先导化合物和生物样品的理想选择。先进的键合化学与超纯硅胶的独特结合,使色谱柱具有卓越性能。无论是在pH1.5或10的条件下,上述这些因素共同作用,可提高极性化合物的分离速度,并在第一次分离时即可得到优异的分离度和对称峰形。另外,也不再需要离子对试剂(如TFA),从而能最大限度地发挥单通道和平行多通道LC/MS系统的性能优势。Pursuit柱执行最严格的质量控制,能够为原料药和获批药物提供可靠、毫无问题的分析。生产工艺中每一步的严格控制和验证确保了色谱柱的重现性。您的实验室通过使用Pursuit柱,即能获得极为优良的结果。诸如PursuitPFP(适用于高极性化合物)和PursuitPAH(适用于环境分析)等特殊选择性柱能为您
最具挑战性的应用提供更出色的选择性。
Pursuit
Pursuit色谱柱采用200?的大孔径硅胶,适用于LC/MS和高通量应用。高配位基密度可提供快40%的分离速度,且不损失分离度。这些都是通过大孔径硅胶优化传质而实现。
PursuitXRs
PursuitXRs具备了在分析研发、质量控制和制备应用方面的性能。PursuitXRs色谱柱具有的高配位基密度、100?孔径、高比表面积硅胶,提高了生产率。因为该色谱柱在保持优异分离度的同时,提供了最大的负载能力、出色的稳定性和方便的可扩展性。
PursuitXRsUltra
为使任何仪器都能够在速度和分离度上达到极限,我们设计了采用优化的2.8μm粒径填料和先进的填充工艺。现在,您可以在保持高分离度的同时缩短运行时间。较低的背压允许使用高流速,并且2.8μm的超纯硅胶颗粒的柱效比3μm色谱柱高10-15%。
键合相 | 配位基覆盖率 | 孔径 | 空容 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
PursuitC18 | 3.5umol/m2 | 200A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 12.9% | 200m2/g |
PursuitC8 | 3.8umol/m2 | 200A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 7.4% | 200m2/g |
Pursuit联苯 | 2.8umol/m2 | 200A | 11mL/g | 1.5-8 | 有 | 7.3% | 200m2/g |
PursuitPFP | 3.4umol/m2 | 200A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 6.3% | 200m2/g |
PursuitPAH | 200A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 200m2/g | ||
PursuitXRsC18 | 2.9umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 22% | 440m2/g |
PursuitXRsC8 | 3.7umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 15% | 440m2/g |
PursuitXRs联苯 | 2.6umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-8 | 有 | 14.6% | 440m2/g |
PursuitXRsSi | 100A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 440m2/g | ||
PursuitXRsUltraC18 | 3.2umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 23.2% | 440m2/g |
PursuitXRsUltraC8 | 3.6umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-10 | 有 | 15% | 440m2/g |
PursuitXRsUltra联苯 | 2.6umol/m2 | 100A | 11mL/g | 1.5-8 | 有 | 14.6% | 440m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值
9)Polaris液相柱
在药物开发等领域,随着目标化合物的极性不断增加,拥有一支在水相条件下具有良好性能的反相柱就显得极为重要了。保留固然重要,但也不能发生棘手的次级相互作用。同样,也要避免固定相塌陷和保留时间漂移。解决此问题的最佳色谱柱就是我们的Polaris系列极性改性柱。从我们基础硅胶的抗塌陷孔结构,到可润湿性的键合相,Polaris柱适用于高水相条件。该柱具有高密键合、使用超纯硅胶和硅醇基等特点,可获得比其它极性改性柱更好的峰形。
Polaris系列产品对C18和C8固定相进行了不同的极性改性。
PolarisC18-A当您需要使用极性改性柱分离时,PolarisC18-A是最佳起始柱。C18-A的极性改性有助于避免低有机相条件下峰形不好和保留问题。
PolarisC8-A
PolarisC8-A提供了与标准C8固定相不同的选择性,疏水性比PolarisC18-A低,使其更适用分析极性样品,总分析时间更短。
PolarisC18-Ether
PolarisC18-Ether提供了与PolarisC18-A和标准C18固定相不同的选择性,通常能增加极性化合物的保留,避免死体积。
PolarisC8-Ether
PolarisC8-Ether提供了与PolarisC8-A不同的选择性,特别适用于以氢键分离的化合物。
键合相 | 配位基覆盖率 | 孔径 | 空容 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
PolarisC18-A | 3.9umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 有 | 13.8% | 200m2/g |
PolarisC8-A | 4.8umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 有 | 7.4% | 200m2/g |
PolrisC18-Ether | 3.3umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 有 | 12.1% | 200m2/g |
PolarisC18-Ether | 4.5umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 有 | 7.1% | 200m2/g |
PolarisC8-Ether | 4.4umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 有 | 15% | 200m2/g |
PolarisNH2 | 3.8umol/m2 | 180A | 1.1cm3/g | 酰胺 | 5.5% | 200m2/g |
PolarisSI-A | N/A | 180A | 1.1cm3/g | N/A | N/A | 200m2/g |
10)AgilentTC-C8(2)和HC-C18(2)
对于考虑成本节约的用户,如果您需要常规液相色谱柱并且不需要单独测试ZORBAX、Pursuit或Polaris色谱柱,安捷伦TC(2)/HC(2)色谱柱是一个替代选择。
TC-C18(2)安捷伦的TC-C18(2)适合分析各种样品,包括天然产物萃取物样品、中药和环境样品、或者需要分析极性和非极性化合物的混合物,包括强碱性化合物。
?较低的碳载量——12%
?非常适合于极性化合物和从低比例有机相开始的梯度分离,或宽的有机相比例范围
?很适合于溶解在水中的样品,或者几乎是100%的水样品
?可以采用绝大多数常见流动相,包括甲酸、乙酸、三氟乙酸(TFA)和磷酸,其中乙腈和甲醇作为有机改性剂
?在pH2-8范围内有优异的性能
HC-C18(2)
安捷伦的HC-C18(2)是具有更高碳载量的C18色谱柱,保留作用更强。是替代其它高碳载量色谱柱的理想产品,而且能获得碱性化合物的优异峰形。
?更高的碳载量(17%)为中等极性和非极性化合物提供更高的保留
?尤为适用于非极性化合物和从中等含量有机相的起始分离(有机相至少大于10%)
?是工业样品或溶于有机溶剂/大比例有机溶剂中样品的良好选择
?在宽pH范围(2-9)内稳定,具有最大的灵活性适
键合相 | 孔径 | 温度限 | PH范围 | 封端 | 碳载量 | 比表面积 |
TC-C18(2) | 170A | 60℃ | 2.0-8.0 | 有 | 12% | 290m2/g |
HC-C18(2) | 170A | 60℃ | 2.0-9.0 | 有 | 17% | 290m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值
固定相名称 | 货号 | 长度 | 内径 | 粒径 | 市场价格 |
TC-C18(2) | 588935-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 3125.3元 |
588925-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 3340.11元 | |
HC-C18(2) | 588915-902 | 150mm | 4.6mm | 5um | 3125.3元 |
588905-902 | 250mm | 4.6mm | 5um | 3340.11元 |
11)PlRP-S液相柱
?耐用的弹性填料提供重现性结果,寿命更长
?热稳定和化学稳定性高
?遵循USPL21标准
?用于生命科学、化学、临床研究、能源、环境、食品和农业、材料科学和制药行业
?100A-4000A的孔径可用于分离小分子到大分子复合物及多核苷酸
PLRP-S系列色谱柱包括各种孔径和填料尺寸,它们都具有相同的化学特性和基本吸附特性。这些填料本质上是疏水的,因此没有键合相,烷基配体需要进行反相分离。因此,能得到无硅醇基、无重金属离子的高重现性原料。该色谱柱拥有多种产品系列,适用于纳流/微量分离,包括自下而上和自上而下的蛋白质组学、分析型分离以及制备纯化。此外,Process色谱柱可以用大量散装填料进行装填。
PH范围 | 1-14 |
缓冲液成分 | 无限制 |
有机改性剂 | 1-100% |
温度上限 | 200°C |
最大压力 | 5-8μm:3000psi(210bar) |
3μm:4000psi(300bar) |
12)ZoRBaX离子交换柱——SaX和ScX
?ZORBAXSAX和300SCX色谱柱采用耐用的Zorbax硅胶
?在pH2-7范围内稳定
?提供高柱效和快速分离
?与有机流动相改性剂兼容
安捷伦ZORBAX强离子交换色谱柱现提供强阴离子交换(SAX)和强阴离子交换(300SCX)色谱柱类型。每种色谱柱均填充了键合的5μm球形硅胶填料,具有最高的柱效。
ZORBAXSAX填料带有永久键合的季铵基。采用一种三官能团有机硅烷化试剂生产这种填料,以增加它在含水流动相中的稳定性。这种色谱柱是分离水溶性化合物的理想选择,例如芳香族和脂肪族羧酸,以及磺酸类。
ZORBAXSCX填料孔径为300,并且其硅胶颗粒上化学键合了芳族磺酸基团。这种色谱柱常用于分?离碱性、水溶性化合物和生物分子。
键合相 | 孔径 | 最大压力 | PH范围 | 官能团 | 比表面积 |
ZORBAXSAX | 70A | 350bar | 2.0-7.0 | 季铵 | 300m2/g |
ZORBAXSCX | 300A | 350bar | 2.0-7.0 | 磺铵 | 50m2/g |
指标只代表一般意义上的典型值.
二 : 安捷伦液相色谱
Agilent(安捷伦)1200液相色谱仪培训教程 一、 培训目的:
● 基本了解1200LC硬件操作。(www.61k.com]
● 掌握化学工作站的开机,关机,参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
二、 培训准备:
1、仪器设备: Agilent 1200LC
● G1310A :(单元泵);G1312A(二元泵);G1311A(四元泵)。 ● G1313A(自动进样器)。
● G1316A(柱温箱)。
● G1314A(VWD检测器)。
● G1362A(示差检测器)。
● G1315A/B (DAD检测器)。
● G1321A (FLD检测器)。
● 色谱柱: Zorbax eclipse XDB C8,150mm×4.6mm i.d。
2、溶剂准备:
● 色谱级纯或优级纯乙腈(ACN)或甲醇。
● 二次蒸馏水
基本操作步骤:
(一)、开机:
1、打开计算机,进入Windows NT (或Windows 2000)画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online图标,化学工作站自动与1200LC通讯,进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”,“Show status toolbar”,“System diagram”,”Sampling diagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
8 、设Flow:5ml/min,单击OK。
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
9、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump control选项,选中On,单击OK,则系统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。(www.61k.com)
10、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump Control选项,选中Off,单击Ok关泵, 关闭
Purge valve。
11、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入Pump编辑画面,设Flow:1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标,如图所示(以二元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积。单击Ok。
(二)数据采集方法编辑:
1、开始编辑完整方法:
● 从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项,如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项,单击Ok,进入下一画面。
2、方法信息:
● 在“Method Comments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。 ● 单击Ok 进入下一画面。
3、泵参数设定:(以二元泵为例)
● 在“Flow”处输入流量,如1ml/min,在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。 ● 单击Ok进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:
● 选择合适的进样方式, 如图所示,进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为
6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。
●
点击Ok进入下一画面。
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5、柱温箱参数设定:
● 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。(www.61k.com)
● 点击ok进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:
● 在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在”Peak width (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min (2s)。
● 在Timetable 中可以“Insert”一行,输入随时间切换的波长,如1min ,波长=300nm。点击ok进入下一画面。
7、DAD检测器参数设定:
● 检测波长: 254nm,BW=30nm, 参比波长=350nm,BW=100nm; ● 检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW: 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width(Response time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。
● 点击Ok进入下一画面。
8、 RID检测器参数设定:
● 色谱条件:
进样体积: 20ul 。 光学单元温度: Off 。
极性: 正 。 峰宽(响应时间) : 4s 。
● 如图所示: “Optical Unit Temperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S,只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after
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analysis”---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。(www.61k.com]
● ***** 点击RID图标,选择RID Control :Heater 设为On,若要循环流动相,必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池,将其设为On,并输入Purge 时间。
9、 FLD检测器参数设定:
色谱条件:
● 样品:P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。
● 进样体积:5ul。
● 柱温箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 ● 响应时间=4s. 停止时间: 出峰完毕。
● Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。
● Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。
● PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。
● “Peak width”:大多数应用设为4s,只有快速分析采用小的设定值。
● Multi Ex : 多波长及光谱(激发)。
● Multi Em:多波长及光谱(发射)。
● 同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。 10、 在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”,单击Ok。 11、 单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入一方法名,如
“test”,单击Ok。
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12、 从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单
击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中
Windows 2)。[www.61k.com]
13、 从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项,如上图所示,
输入操作者名称,在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。
区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Prefix—在Prefix 框中输入前缀,在Counter 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001,vwd0002??。
14、 从Instrument 菜单选择System on。
15、 等仪器Ready,基线平稳,从Method菜单中选择“Run method”,进
样。
(DAD, VWD色谱图如下所示:)
(三)、数据分析方法编辑:
1、 从“View”菜单中,单击“Data analysis”进入数据分析画面。
2、 从“File”菜单选择“Load signal”,选中您的数据文件名,如下图
所示。单击Ok。
3、
做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项,。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间,单击ok,或选择”Use Ranges”调整。反复进行,直到图的比例合适为止。
4、积分:
(1)、从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项,选择合适的Slope sensitivity,Peak width,Area reject,Height reject。
(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项,则数据被积分。
(3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
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(4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。(www.61k.com]
5、打印报告:
(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,进入如上画面。
(2)、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角,选中Percent(面积百分比),其它选项不变。
(3)、单击Ok.
(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则单击Report 底部的“Print”钮。
(四)、关机:
● 关机前,用 100%的水冲洗系统40分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵,(适于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
● 退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down关)。 ● 关掉Agilent 1200电源开关。
(五)、Agilent 1200 LC维护保养:
1、 色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(如ACN适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相)
2、 对于手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时搬动进样阀数次,每次数毫升。
*3、流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。
*4、带seal-wash的 1200,要配制90%水+10%异丙醇,以每分2—3滴的速度虹吸排出,溶剂不能干涸。
5、其它主意事项见说明书,或由现场工程师介绍。
维护知识问答
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
1、 为什么溶剂和样品要过滤?
溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。[www.61k.com]
色谱柱:由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
样品过滤头的类型:
30mm内径:适用于大进样量的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50μl。
13mm内径:适用于范围广的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格,材料为纤维素。
3mm内径:适用于小进样量的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格。处理样品体积为7μl。
滤膜类型:
聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐,并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜: 不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶液,推荐 用于蛋白质和其相关样品。
尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸, 70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜:具有蛋白吸收低,同样适用水溶性样品和有机溶剂。
2、 为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项?
HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.
清洗液配制: 90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力。以3-4滴/min的速度虹吸流下,不能干涸。
3、 为什么Agilent 1200LC的流动相管路非常细?
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。(www.61k.com]因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,Agilent 1200LC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。
毛细管线分类:0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红色。
PEEK 管线:内径 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛细管线优点: 柔韧性好.
***Agilent 公司同时备有1/16in 的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户 ,优点是刚性好,但柔韧性差一些。
4、 流动相使用前为什么要脱气?
流动相使用前必须进行脱气处理,以除去其中溶解的气体(如O2),以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音,造成灵敏度下降,甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化,柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLD,可能会造成荧光猝灭。
常用的脱气方法比较:
氦气脱气法:利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效果较好,但成本高。
加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染。 抽真空脱气法:易抽走有机相。
超声脱气法:流动相放在超声波容器中,用超声波振荡10-
15min,此法效果最差。
在线真空脱气法:Agilent1200LC真空脱机利用膜渗透技术, 在线脱气,智能控制,无需额外操作,成本低,脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。
5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞,以及堵塞后的处理?
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行,尤其水溶液或磷酸盐缓冲液(PH=4—7)。[www.61k.com]以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。
A:请严格执行溶剂过滤。
B:请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液
C:如果应用许可,可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠. D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。
E:避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下,尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。
堵塞后的处理法方法:
将过滤头从组件中取下,在浓硝酸(35%)中浸泡1h,然后用二次蒸馏水冲洗干净并超声处理。
6、 Agilent 1200LC泵如何维护?
Agilent 1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相,及时合理的维护非常重要。
A:流动相使用前请必须脱气、过滤。
B:使用缓冲盐时,要加在线Seal-wash选项。
C:关机前,用 100%的水冲洗系统40分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如甲醇),然后关泵,(适于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
D:及时更换Purge Valve内的过滤芯。(当打开Purge Valve时,压力高于10bar,表明过滤芯已堵)。E:使用合适的密封圈。
7、 如何选择合适的泵头活塞密封圈?
泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用,但使用正相溶剂(如正己烷),不适合使用标准活塞密封圈,特别是长时间使用时,需更换另一种不同的密封圈,我们建议使用聚四氟乙烯密封圈。
(p/n0905-1420 2/pk)
***注意:聚四氟乙烯密封圈的压力范围为:0—200bar;建议在泵的压力限制中,将最大压力设为200bar。
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
8、 使用梯度比例发时要注意那些事项?
当盐溶液与有机溶剂溶液混合时,盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶,而不会出现沉淀。(www.61k.com]但是在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,阀A接水相/盐溶液,D接有机溶剂,此法连接可有效使盐回落到盐溶液中,并被溶解。若颠倒过来,盐可能落在有机溶剂中,出现问题。
强烈建议:当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时,推荐将缓冲盐通道接在A通道上,有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上;定期用水冲洗所有的通道,以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
9、 在线真空脱气机使用要注意那些事项?
一般来说,Agilent 1200LC 的真空脱气机无需过多维护,只需注意几个注意事项就可以了。
A:第一次使用,要用随仪器附带的注射器抽满脱气机腔体;更换不同类型的溶剂时,要先抽空,再抽满。
B:不用的通道要充满溶剂或密闭起来。
10、 更换色谱柱时要注意什么事项?
在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低 。为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,仪器的流动相管路连接非常重要,一般Agilent 1200LC 在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美。客户只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了,一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头,柱子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧街头,当完成第一次安张后,不锈钢卡套已固定死,当接不同的柱子时,要注意柱子接头处的形状和长度,否则会产生一个非常大的死体积。
下面是不同厂家柱子接头的形状和长度,请参考:
安捷伦液相色谱仪 安捷伦液相色谱
11、 手动进样阀需做那些维护,使用时要注意什么?
对于手动进样器,当使用缓冲溶液后,或者进浓度差异比较大的样品时要用专用工具而不是用带针头的注射器冲洗进样口,同时搬动进样阀数次,每次数毫升。[www.61k.com)
注意事项:
● 安装时六通阀的5,6出口要与注射器在同一水平线上,以防止
虹吸现象的发生,导致进样量的重复性变异。
● 进样量的多少要根据定量管的LOOP体积决定。
当样品量少时: 进样体积由注射器的进样体积决定,但最大进样体积 要小于1/2loop体积。
当样品量较多时:进样体积由定量管的体积决定,为保证样品完全把定量管的流动相置换干净,需注射5—6倍的LOOP体积。
● C:要使用专用的液相注射器进样,绝对不可以用气相的注射器。
三 : 安捷伦液相色谱柱选择
ZORBAX 300? StableBond
标志
说明玻璃内衬毛细管柱
规格粒径(μm)
300SB-C18USP L1300SB-C8USP L7300SB-CNUSP L10300SB-C3USP L56
毛细管柱毛细管柱毛细管柱
快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*毛细管柱毛细管柱毛细管柱
快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*
纳流(Nano)色谱柱(PEEK 熔融石英)
0.5 x 2500.5 x 1500.5 x 350.5 x 1500.5 x 350.3 x 2500.3 x 1500.3 x 350.3 x 1500.3 x 1000.3 x 500.3 x 350.1 x 1500.075 x 1500.075 x 500.3 x 5
5553.53.55553.53.53.53.53.53.53.55
5064-82665064-82645064-82945064-82685065-44595064-82655064-82635064-82955064-82675064-82595064-83005064-82705065-99105065-99115065-99245065-99135065-9915
5065-44605065-44615065-44635065-4462
快速分离纳流柱*快速分离纳流柱*快速分离纳流柱*富集/保护柱, 5/包富集/保护柱卡套
*RR:快速分离柱3.5μm
5065-99235065-99145065-9915
在线订购www.agilent.com/chem/store117
安捷伦色谱柱 安捷伦液相色谱柱选择
用于生物分析的色谱柱Extend-C18 键合固定相使用了创新的双配位C18-C18 键合技术
118ZORBAX 300? Extend-C18?在高和低pH (pH 2-11.5) 条件下,稳定分离多肽?在高和低pH 条件下,可能具有不同的选择性?在高pH 条件下,柱效高并可良好地回收疏水性多肽?使用氢氧化铵(改性的流动相)的LC/MS 的理想选择ZORBAX 300Extend C-18 是一种大孔径HPLC 柱,可以在pH 2-11.5 范围内高效分离多肽。(www.61k.com)独特的、双配位键合固定相保证了色谱柱在高和低pH 的条件下具有较长的使用寿命和出色的重现性。在高pH 条件下,由于分子电荷的变化,导致多肽的保留和选择性发生显著变化。在室温和高pH 条件下,对疏水性较强的多肽可以实现优异的回收率。在高pH 条件下,使用简单的含氢氧化铵的流动相还可以提高LC/MS 对多肽的灵敏度。
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用于生物分析的色谱柱
用Extend-C18 进行血管紧张素的LC/MS 分析色谱柱:
ZORBAX Extend-C18773700-902
2.1 x 150 mm, 5 μm
酸性条件:
A:含0.1% 三氟乙酸的水溶液
B:0.085% 三氟乙酸80% 乙腈(ACN)碱性条件:
A:10 mM NH4OH 的水溶液
B:10 mM NH4OH 80% 的乙腈溶液0.2 mL/min15 分钟内15-50%B35°C
正离子ESI- Vf 70V, 毛细管电压4.5 kV,N2-35 psi, 12 L/min., 325°C2.5 μL 样品(各50 pmol )血管紧张素I, II, III
流动相:
流速:梯度:柱温:MS 条件:样品:
TIC (200-1500 m/z)
659.7720.3767.3
250.9
844.8
1277.91326.31373.31296.6
340.3398.0458.0
1025.2
1179.1
A:
血管紧张素I最大:10889低pH
12.050
433.0
5.0E64.0E63.0E62.0E61.0E600
2.5
5.07.510Time (min)
AII + AIII
10080
13.261
649.5
+3
+2
60
AI
4020
227.1
12.5
05001000
m/z
TIC (200-1500 m/z)
8.477
2.0E71.0E700
2.5
5.499
B:
血管紧张素I最大:367225高pH
4.0E7
AII
AI
9.621
80
AIII
433.0
649.0
5.0E7100
+2
3.0E7604020
+3
659.8
5.07.510Time (min)
12.5
+1m/z
LC30003
05001000
参考文献:B.E. Boyes. Separation and Analysis of Peptides at High pH Using RP-HPLC/ESI-MS, 4th WCBP, San Francisco, CA Jan 2000.
小分子肽和大分子肽在高和低pH 下都显示出了选择性的变化。[www.61k.com]在高pH 下,由于带电荷状态发生了改变,所有三种血管紧张素都能够分开。此外,在高pH 下用含氨水的流动相,可以看到血管紧张素I 的图谱清晰度有了显著提高。也可以用Extend-C18 柱在高pH 下分析小分子肽。
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1468.8
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ZORBAX 300? Extend-C18标志说明
分析柱
分析柱
快速分离柱
快速分离柱
快速分离柱
快速分离窄径柱*
快速分离窄径柱*
玻璃内衬毛细管柱规格4.6 x 2504.6 x 1504.6 x 1504.6 x 1004.6 x 502.1 x 1502.1 x 100粒径(μm)553.53.53.53.53.5
61阅读/ www.61k.net
3.5
3.5
3.5
3.5部件号770995-902773995-902763973-902761973-902765973-902763750-902761775-902
5065-44645065-44655065-44665065-4467快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*快速分离毛细管柱*
*RR:快速分离柱3.5μm0.3 x 1500.3 x 1000.3 x 750.3 x 50
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用于生物分析的色谱柱122ZORBAX 氨基酸分析(AAA)柱和消耗品ZORBAX Eclipse 氨基酸分析(AAA)柱?24种氨基酸的高分离度快速分析?为氨基酸分析进行了测试?采用常用的OPA 和FMOC 进行柱前衍生?使用安捷伦1100/1200自动进样器,用详细的在线衍生化方案轻松实现自动化用安捷伦ZORBAX Eclipse AAA 高效柱按照升级和改进的方案,可以快速分离各种氨基酸。(www.61k.com]在较短的7.5 cm 长色谱柱上从进样到下一次进样的总分析时间可以缩短到14分钟(分析时间9分钟),在15 cm 长的柱子上为24分钟(分析时间18分钟)。使用安捷伦1100/1200液相色谱仪,采用OPA 和GMOC 进行衍生化反应,进行全自动化分析,获得了卓越的灵敏度(DNA、FLD 的灵敏度为5-50 pmol)和可靠性。ZORBAX Eclipse 氨基酸分析(AAA)柱标志说明规格粒径(μm)部件号分析柱常规灵敏度4.6 x 1505993400-902分析柱,使用FLD 得到常规灵4.6 x 1503.5963400-902敏度、高分离度分析柱,常规灵敏度、高通量4.6 x 753.5966400-902溶剂节省柱,高灵敏度、高分
3.0 x 1503.5
961400-302在线订购www.agilent.com/chem/store
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氨基酸标准品,10 x 1 mL 安瓿*
说明1 nmol/μL250 pmol/μL100 pmol/μL25 pmol/μL10 pmol/μL
氨基酸补充试剂盒
包括正缬氨酸、肌氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺、色氨酸和4-羟基脯氨酸各1g
*由于保存期短,故一次购买有限的数量,5062-2478 1 g/瓶
部件号5061-33305061-33315061-33325061-33335061-33345062-2478
氨基酸分离试剂
说明
OPA 试剂,10 mg/mL 的邻苯二甲醛(OPA) 和3-巯基丙酸分别溶于0.4 M 硼酸盐缓冲液,6 x 1 ml 安瓿
FMOC 试剂,2.5 mg/mL 氯甲酸9芴基甲酯乙腈溶液,1 ml,10 安瓿硼酸盐缓冲液,100 ml
DTDPA (二硫代二丙酸) 试剂,用于分析半胱氨酸,5 g
部件号5061-33355061-33375061-33395062-2479
使用ZORBAX Eclipse-AAA 方案高分离度分析24 种氨基酸色谱柱:
ZORBAX Eclipse AAA963400-902
4.6 x 150 mm, 3.5 μm
A: 40 mM Na2HPO4,pH 7.8B: 乙腈:甲醇: 水,45:45:10 v/v2 mL/min40°C荧光检测器24 种氨基酸
1
2
1.2.3.4.5.6.
AspGluAsnSerGlnHis
3
84
79
7.8.9.
GlyThrCit
13.Cys14.Val15.Met16.Nva17.Trp18.Phe
1617
181915
22
23
19.Ile20.Leu21.Lys22.Hyp23.Sar24.Pro
10.Arg11.Ala12.Tyr
流动相:
流速:柱温:检测器:样品:
10
1112
1420
6
24
21
24 种氨基酸在18 分钟内得到高分离度的分离。(www.61k.com)如果选择
快速分离4.6 x 75 mm Eclipse AAA 色谱柱,这些氨基酸可在9 分钟内完成分离。
5
0510
Time (min)
152025
LCPAH01
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用于生物分析的色谱柱
124ZORBAX GF-250
和GF-450 凝胶过滤色谱柱?高柱效和高重现性,且分析时间短?亲水性二醇键合固定相,实现蛋白质高回收率?与有机改性剂和变性剂兼容?pH 范围(pH 3-8) 宽Agilent ZORBAX GF-250 和GF-450 体积排阻(凝胶过滤)色谱柱是蛋白质和其他生物分子进行体积排阻分离的理想选择。[www.61k.com]将GF-250 和GF-450 色谱柱串连使用时,可分离的球状蛋白质范围为4,000-900,000。GF-250/GF-450 体积排阻色谱柱具有亲水性二醇键合固定相,可实现蛋白质的高回收率(通常>90%);还具有独特的经过氧化锆改性的硅胶,从而将pH 范围扩展到从pH 3 ~ 8。GF-250 和GF-450 色谱柱填充有孔径和粒径尺寸分布较窄的精确多孔硅胶微球。因此这款体积排阻色谱柱,可在流速高达3 mL/min 条件下耐用,高重现性及高效地分离蛋白质。这些色谱柱可与流动相中的有机改性剂(<25%) 和变性剂兼容,并可消除蛋白质聚合,从而实现正确的分子量测定。常见的应用包括蛋白质单体的分离、二聚物和聚合体的分离、脱盐、蛋白质分子量判断以及改性蛋白质的分离。在线订购www.agilent.com/chem/store
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在ZORBAX GF-250 SEC 色谱柱上分离蛋白质标样色谱柱:
ZORBAX GF-250884973-901
9.4 x 250 mm, 4 μm
200 mM 磷酸钠,pH 7.02 mL/min室温254 nm
样品:
5
流动相:流速:柱温:检测器:
BioRad 凝胶过滤标样
1. 甲状腺球蛋白670,000 Da2. 牛g-球蛋白158,000 Da3. 鸡卵清蛋白44,000 Da4. 马肌红蛋白17,000 Da5. 维生素B-12 1,350 Da
1
4
此处分离的蛋白质标样是一组常用的蛋白质标样。(www.61k.com]ZORBAX GF-250 色谱柱对此样品表现了出色的分离度。通过串联连接GF-450 色谱柱可以进一步提高甲状腺球蛋白的分离度。
23
0123
4Time (min)
5678
LCGF001
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用于生物分析的色谱柱
快速体积排阻分离色谱柱:
ZORBAX GF-450884973-902
9.4 x 250 mm, 6 μm
PBS(磷酸盐缓冲液),pH 7.43 mL/min室温220 nm
BSA 和BSA 二聚体
快速体积排阻分离2色谱柱:
ZORBAX GF-450884973-902
9.4 x 250 mm, 6 μm
200 mM磷酸二氢钠
pH 7.0/0.1% 叠氮化合物2 mL/min225 nm
10 μg 溶于50 mM磷酸钠pH 7.0
流动相:流速:柱温:检测器:样品:
流动相:
流速:检测器:样品:
A: BSA 和BSA 二聚体(重复进样)
2
1.2.3.
BSA 二聚体BSA 单体叠氮化物
2
B: 抗体的分离
2
1.2.3.
IgG 二聚体和凝聚物鼠IgG 1K (MOPC 31C)盐:Tris, Na2HPO4, NaCl
1
Inj. #1
3
Inj. #2
1
3
1
10
1
2
3
3
5
Time (min)4567Retention Time (min)
8910
LCGF002
126在线订购www.agilent.com/chem/store
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ZORBAX GF-250 和GF-450 凝胶过滤色谱柱
标志
说明GF-250, 150?GF-250, 150?GF-450, 300?
规格9.4 x 2504.6 x 2509.4 x 250粒径(μm)
446部件号884973-901884973-701884973-902在线订购www.agilent.com/chem/store127
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用于生物分析的色谱柱128安捷伦Bio-Monolith 液相柱?基于聚合物的整体液相柱是为生物大分子分离而设计的?不依赖于流速的分离;无扩散、无孔隙、无死体积,使流动相和固定相之间的转换非常迅速?整体盘为5.2 mm x 4.95 mm (100 μL 柱体积),带有连续的通道,消除了扩散传质?极快的分离速度加快了方法开发速度,降低了成本。(www.61k.com)锁定方法参数明显缩短时间,减少了缓冲液用量安捷伦Bio-Monolith 液相柱—提供抗体(IgG, IgM)、质粒DNA、病毒和噬菌体,以及其它生物大分子的高分辨、快速分离。该产品系列提供强阳离子交换、强和弱阴离子交换和蛋白A固定相。Bio-Monolith 液相柱与HPLC和制备液相色谱系统兼容,包括安捷伦1100和1200 HPLC
系统。
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用于生物分析的色谱柱
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对您工作上的技术支持
有硬件、软件、应用、仪器维修或故障诊断方面的问题吗?安捷伦的技术专家将为您解答问题。[www.61k.com]我们的技术支持专家拥有多年的实验室工作经验,可以提供专业知识和经验。如果在本手册中发现与色谱柱相关的问题,请致电当地的安捷伦分公司或800-820-3278。也可以访问www.agilent.com/chem/techsupport,获取丰富的知识和提示,包括:?常见问题
?下载和应用程序
?安装和维护录像
?交互式故障查找工具
?保修信息
?技术支持联系信息
用安捷伦ZORBAX 液相柱清除一
切障碍
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