一 : 贴壁细胞培养之更换培养液

更换培养液

1、仔细检查所培养的细胞，观测是否有污染或发生细胞变性，一经发现，立即丢弃。

2、检查培养液的颜色如从红色变为黄色时，或细胞密度较大时估计培养液中的营养物质将耗竭，更换细胞培养液。一般一周至少更换二次培养液，不过大部分人是2到3天更换一次，这还要看自己所养细胞状态。我自己养的A549状态特别好的时候，几乎每天传代，更别说换液了。

3、在超净工作台内吸去或者倒出培养器皿中的旧培养液，(若采取倒的办法，要从细胞贴壁面的反面倒出）用PBS清洗（冲洗）一两次。另每次倒出后都要将瓶口过一下酒精灯火焰。

4、用吸管加入预热至36.5摄氏度到37摄氏度的新鲜完全培养液。（我图方便一般是直接倒）完全培养液一般由1*合成培养液+10%胎牛或小牛血清+100IU/ml青霉素和100mg/ml链霉素组成。

5、加入培养液的体积和培养器皿表面积之比应在0.2到0.5ml/cm2之间。若培养液层太深则影响氧气的弥散，若高浓度氧气需要细胞培养液层应较浅（2mm)。低浓度氧气需求的细胞系培养液层可较深（5mm）。（我自己的操作：一般小培养瓶加5-7ml，大培养瓶加10-15ml)

6、把培养细胞放回细胞培养箱中培养。（自己实际操作：在放入培养箱前显微镜下观察一下细胞状态以及细胞是否干净，用酒精棉球擦擦瓶外壁。）

二 : 细胞培养液配方

细胞培养常用溶液配方

一 PBS配方：

方法一 1×PBS(Phosphate-Buffered Sallines)

Na2HPO4、Na2HPO4?7H2O、Na2HPO4?12H2O中任选其一。［www.61k.com］

方法二 母液的配制：

0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PBS(pH=7.4)的配制：

先配 0.2M PBS(pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：

0.1M PBS（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PBS（PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PBS（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

细胞培养液 细胞培养液配方

细胞培养常用溶液配方

二 细胞培养液配方：（200ml）

RPMI-1640培养基 (180ml)

胎牛血清 (20ml)

双抗 （2ml）

溶液各组分终浓度为90%RPMI-1640培养基 +10%胎牛血清+1%双抗（200mM L-谷氨酰胺、10mg/ml链霉素和10000U青霉素）

三 细胞冻存液配方：(20ml)

RPMI-1640培养基 (14ml)

胎牛血清 (4ml)

DMSO （2ml）

双抗 (0.2ml)

三 : 培养细胞的基础液和培养液有什么区别？

培养细胞的基础液和培养液有什么区别?

培养细胞的基础液和培养液有什么区别？的参考答案

基础液是指DMEM高糖培养基、F12培养基等.里面只含有缓冲液、盐离子、谷氨酰胺等.

而培养液需要在基础液的基础上再增加维持细胞生长的其他必需物质.比如多数细胞还需

加入10%的牛血清等.

本文标题：细胞培养液-贴壁细胞培养之更换培养液
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