一 : 褶皱臂尾轮虫的培养-小型培养
轮虫的小型培养目的是为生产性大量培养提供种轮虫(包括进行各种实验研究),其过程自种轮虫的分离和休眠卵的孵化开始,培养多是在室内进行的较小设施、规模的培养。
一、种轮虫的分离
培养轮虫首先需要有种轮虫,目前使用的种轮虫最初都是从天然水体中分离出来的,这些轮虫品系一般都经过长期研究 和实际使用证明具有优良的品质,一般不需自行分离,可以由有关单位供应。方便时也可以自己分离。
褶皱臂尾轮虫生活在半咸水和海水中。春天,当水温升高达15℃以上,在海边高潮区的小水洼、小水塘中,尤其是水质较肥,浮游藻类繁生的水中,常生活着褶皱臂尾轮虫。可用网目120微米左右的浮游生物网在这些小水体中捞取。最好是在清晨日出之前,轮虫向水表层游动时捕捞。把捞取的样本,先用网目为300微米的尼龙网滤掉小鱼、杂物,再集中于容器中放置数小时,利用轮虫对于缺氧或恶劣环境抵抗力强的特性,待桡足类及其他浮游动物等死亡沉于水底时,再用纱布或滤纸平放水面使浮在水上层的轮虫粘附其上,取出纱布把轮虫冲洗入另备容器中,即可得到较纯的轮虫。按此方法再经2~3次分离之后,可得到纯种轮虫。也可把采集的水样在解剖镜下检查,如发现褶皱臂尾轮虫,即用微吸管吸出。为了避免混杂其他动物,可先把吸出的水置一清洁的凹玻片中,经观察准确后再吸入试管或小三角烧瓶中培养。轮虫个体较大,很容易用吸管分离。在分离过程中应测定轮虫原生活环境的盐度,培养轮虫用水的盐度应该与原生活环境的盐度相近,因为褶皱臂尾轮虫对盐度的突然变化耐力较低,待分离培养成功后如需要改变培养盐度,必须经过逐渐驯化过程。
二、休眠卵的孵化
—轮虫种可以长期培养保存,也可以以休眠卵的形式长期保藏。秋冬季节,轮虫的冬卵往往大量出现于培养池,从池底沉淀物中可搜集大量的冬卵。由于将卵与污物分离十分困难,可直接将含卵底泥放入冰柜中保存。需要培养时应首先使休眠卵孵化。
(一)休眠卵孵化的条件
轮虫休眠卵孵化的盐度范围为1.5~38,但以15~20的盐度最适宜。
休眠卵孵化的温度范围为5~35℃,但孵化时间则随温度的不同而有明显差异。最适宜的孵化温度为20~25℃。
在孵化容器中,加入少量扁藻或小球藻藻液,使水略呈很淡的藻色,有利于孵化。
光照是结束在黑暗条件下休眠的必要条件。
(二)孵化方法
为了避免敌害生物(小型甲壳动物)的危害,休眠卵孵化及培养所用的海水,需经300目的筛绢网过滤,并加入淡水调节盐度至最适范围。
可用各种玻璃培养缸、小水族箱为孵化容器,容器在使用前应清洗、消毒,再用过滤海水冲洗干净。然后加入孵化用海水,并加入少量藻液。
把少量轮虫休眠卵放人海水中孵化。休眠卵混有大量的藻渣,用量太多易引起水质变坏。孵化容器放置在靠近窗口或有人工照明的位置。孵化期间每天需搅拌数次,或微量充气。
如果条件适宜,一般在3~7天的时间内。即可孵化。由于在孵化容器内有大量死藻渣等杂质使水质欠佳,孵化后的轮虫应及时吸移到备用的培养容器中培养。
三、轮虫培养
(一)培养容器
常用的培养容器有各种玻璃培养缸、水族箱、广口瓶、小型玻璃缸水槽和小水泥池等。
(二)培养用水
各级培养最好采用消毒海水,也可用经严格过滤的海水,如用脱脂棉加250目或300目筛绢过滤或细沙滤池过滤除去敌害生物。如果盐度过高,必须加入淡水调节。因褶皱臂尾轮虫喜欢有机质较多的水,可在培养海水中加入1%~2%的人尿。
(三)接种
一般要求每毫升水接种轮虫1~3个,在适宜的条件下,经过10天左右的培养即可达到收获的密度。接种的数量小些,除了需要较长的培养时间外,其他并无不良影响。以面包酵母为饵料,其接种密度应大于以单胞藻为饵料的接种密度。
(四)投饵
小型培养轮虫的饵料,多采用小球藻、扁藻等单细胞藻类,也可使用各种酵母。
单细胞藻类一股单独培养投喂。每天投喂2次。投饵量不宜过多,以轮虫能吃饱又不过剩为标准。一般掌握投饵量的标准是投饵后,培养海水呈淡的藻色,在下次投饵之前培养海水基本变清。扁藻的投饵量是2.5万~5万个细胞/毫升,小新月菱形藻的投饵量为30万~50万个细胞鹰升。在培养过程中,要随着轮虫数量的增加,相应增加投饵量或投饵次数。此外,环境条件(如水温、水中铵态氮等)不同也影响摄饵量。因此,必须根据具体情况调节投饵量。
也可以在培养轮虫的容器内直接加营养盐,同步培养藻类,这就需要同时满足轮虫和藻类生长的条件,特别应注意光照条件的满足。但用此法培养的饵料,一般不能满足轮虫的需要,尤其在培养后期当轮虫的数量较多时更是如此,在此情况下必须补充投饵。但有时也有藻类繁殖过盛,影响轮虫生长的情况。
(五)搅拌和充气
每次投饵后,需轻轻地搅拌。一方面可使饵料分布均匀,另一方面可以增加水中的氧气。如果采用 充气的方法,则只能是微泡充气,使培养水面不形成大的水波。
(六)生长情况的检查
轮虫生长情况的好坏和繁殖速度 的快慢是培养效果的反映。所以在培养过程中必须经常观察检查轮虫的生长情况,以便针对存在的问题及时采取措施,不断改进培养方法,提高培养水平。
观察在每次投喂前进行,注意轮虫的游动是否活泼正常、分布是否均匀、密度是否一天天加大、剩余饵料量的多少等。游动不活泼、分布不均匀、多沉于底部或密集于表层等都是不正常现象。必要时可作镜检,吸取少量轮虫于小培养皿中,在解剖镜或显微镜下观察,生长良好的个体肥大,胃肠饱满,游 动活泼,多数成体带夏卵,少的1~2个,一股3~4个,最多可达14个。如果轮虫多数不带卵、或带冬卵、雄体出现、轮虫死壳、沉底、活力弱等都是不良现象。另外,通过镜检轮虫胃含物多寡、吃得饱不饱,投饵前培养海水中剩余饵料量的多少,了解投饵量的合适与否。
轮虫密度的检查,可用肉眼估计,最好采取镜检计数,即于培养池各部位取样后,用碘液杀死轮虫,然后在解剖镜下计数,以推算培育池中的轮虫密度。
(七)扩大培养
如果条件适宜,培养得法,轮虫的繁殖是很快的。经过一段时间的培养(一股l天左右),数量迅速增多。密度过大对继续生长不利,应进行扩大培养。
二 : 褶皱臂尾轮虫的培养方法
轮虫(Rotifer)是一群微小的多细胞动物,种类繁多,广泛分布于淡水、半咸水和海水水域中,是水中浮游生物的主要组成部分,和鱼类、甲壳类的重要的天然饵料生物,历来受到人们的重视。人们对轮虫的生物学、人工培养和应用进行过许多的研究,其中以半咸水种类—褶皱臂尾轮虫(以下简称轮虫)的研究最为深入,它具有生活力强、繁殖迅速、营养丰富、大小适宜和容易培养等特点,可至少在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培养过程中应用。三 : 褶皱臂尾轮虫的培养-室内工厂化培养
轮虫室内工厂化培养,指利用室内工厂化培养池,进行生产性集约化大量培养。这种培养方式,培养条件可得到较好的控制,产量高,生产比较稳定。
一、培养设施
培养室一股为砖瓦结构,墙壁留有窗户,以利于采光和通风。房顶可采用玻璃钢波形瓦,也可采用一般的瓦结构,后者应留足窗户。
轮虫培养池多采用混凝土结构,单池面积10~50平方米不等,水深1.2米左右。池底设有排污孔。池内附设加温、充气设施。散气石每5平方米底面积设置1枚即可,充气量不宜太大。供水设施中应设砂滤和网滤装置,必要时还应进行海水消毒。厂内应具备专门的单胞藻培养设施,以提供轮虫培养池接种繁殖和投喂所用的单胞藻。
二、培养前的准备
轮虫接种、培养前首先应进行清池,然后进水并接种繁殖或投喂单胞藻,使其达到一定密度,迎接种轮虫接种。
培养池使用前必须进行严格消毒、清池。清池药物可用高锰酸钾、漂白粉、次氯酸钠等,应使药液浸及整个池底、池壁,以杀死全部敌害生物。清池后等药效消失,应用过滤(或消毒)水冲洗干净,然后将干净水加至一定高度(应视种轮虫的量而定,以保持足够的轮虫接种密度)后,接种并施肥繁殖单胞藻。当微绿球藻的密度达300万~700万个细胞/毫升,或纤细角刺藻的密度达200万~250万个细胞/毫升,或球等鞭金藻的密度达200万~250万个细胞/毫升时,即可直接向池内接种轮虫。
三、培养管理
褶皱臂尾轮虫的接种密度,当饵料密度高时,以每毫升30万~50万个种轮虫为宜。以单胞藻为饵,接种密度可小些;以面包酵母为饵料,接种密度可大些。种轮虫接种后的管理措施有:
(一)投饵
室内工厂化集约式培养轮虫,多以单胞藻为主要饵料,以面包酵母为补充,或两者混合兼而用之。有些单胞藻培养困难的厂家,也可以以面包酵母为主,或完全投喂酵母饵料,只在轮虫出池前,以单胞藻(多以小球藻)或强化剂进行营养强化。
1.单胞藻投喂
单胞藻是培养轮虫的首选饵料。常用的单胞藻类主要包括小球藻、小新月菱形藻、三角褐指藻、微绿 球藻、球等鞭金藻、纤细角刺藻、扁藻等。其投喂密度和次数并无严格要求。生产中可先将池内单胞藻培养起来,当达到一定密度后,再接种轮虫。以后根据单胞藻密度、水色状况和轮虫的胃肠饱满程度和生长状况,不断补加投喂。
用单胞藻喂养轮虫,应选用处于指数生长期的纯正的单胞藻,勿用老化的、被原生动物污染的藻液。以单胞藻为饵的轮虫培育池应有充足的光照,以促使池内单胞藻的生长和繁殖,增加数量,并起到吸收废物、净化水质的作用。
2.酵母投喂
酵母是迄今发现的最好的替代(单胞藻)饵料,尤其是面包酵母,来源广、营养丰富、成本低、使用方便。鲜、干酵母都可用。购回的鲜酵母通常放在冰柜中储存。投喂前先在少量水中将其融化,充分搅拌成悬浊液后,再均匀泼洒入池。活性干酵母投喂前最好用电动搅磨机加水搅成悬浮状投喂。酵母的用量一般为每100万尾轮虫每天投喂1~1.2克,分2~4次投喂。若全投酵母,用量应相应加大。
(二)充气
工厂化培养需充气,尤其是以酵母为饵的培养,充气不但补充氧气,尚能起到使饵料分布均匀,防止下沉 的作用。早春培养,当池水加温时,充气还可使池内热量分布均匀。但轮虫不喜欢剧烈震荡,充气量宜稳而小,只要保持轮虫不因缺氧而浮于水面即可。工厂化培育一般不采取搅拌充气的做法,以避免将池底污物冲起,使水质败坏。
(三)换水
工厂化培养集约化程度高,轮虫培养密度大,一般应采取换水措施,尤其是以酵母为饵料的培养,更应每天换水,后者每天换水1次,每次50%为宜。换水也可结合轮虫采收进行,即每次轮虫采收后,及时补充藻液和新鲜海水,起到换水的作用。
(四)吸污和倒池
轮虫培养一段时间后,池底污物甚多,尤其是以酵母为饵料的培养,池底更易沉积污物,形成敌害生物的温床,应及时吸出,以减少对轮虫的危害。吸污可用虹吸法,即以虹吸管将池底污物吸入放置尼龙筛绢网的水桶(玻璃钢水槽)内,轮虫留在网内,吸完后使水沉淀,将上层的健康轮虫重新放入原池内培养。若污物中混有甚多原虫等敌害生物,可弃掉,不必回收。
换水和吸污清底只能部分地改善水质状况,如发现池内大量的原生动物繁殖起来,则需对培养水体进行彻底改变,即采取倒池的措施,其方法是用筛绢网慢慢将池内的轮虫全部搜集起来,用过滤海水将网内的轮虫冲洗数遍,冲走原生动物和污物,然后将轮虫转移到另一备好干净海水的培养池内。
(五)轮虫生长情况的检查
与小型培养中的生长检查略同。
(六)轮虫的收获
自接种培养开始,一般经过4~7天的培养,轮虫的密度达到400~600个/毫升时,即可收获使用。
按照培养和收获的程序特点,一般把轮虫培养分为一次性培养、半连续培养和连续培养3种。在室内水泥池工厂化培育中,目前多采用前两种方式。
一次性培养,即在轮虫培养池中,首先培植单胞藻到相当密度,然后接种轮虫,并补投藻液、酵母等饵料。培养4~7天后,当轮虫达到一定密度,即一次全部采收。采收、清池后,重新培养。培养池小(一般10立方米以下)而多,若干个轮虫池可按计划培养,轮流采收,均衡供应轮虫。一次性培养不易造成污染,轮虫质量高,但工作量大。管理麻烦。
收获方法,可用网目100微米的筛绢(以轮虫漏不出为度)制成约40升容量,高40厘米的网箱(有圆钢架支撑), 放置于高约25厘米的大塑料盆或玻璃钢水槽内,用虹吸法将池水吸入网箱内,轮虫即随水入箱,当网箱内轮虫密度较大时,用塑料勺舀取,经冲洗、计数后做为饵料提供鱼、虾、蟹育苗车间,或作为种轮虫继续培养。
半连续培养,即在接种培养4~5天后,轮虫达到一定密度,根据轮虫的繁殖状况,每天以上述虹吸的办法,采收池水容量的1/5~1/3。采收后立即从单胞藻培养池抽取藻液,补回失去的池水量,并继续补充投喂,边培养,边收获。这种方法操作方便,但池内残饵粪便逐渐积累后,会造成污染,使水质恶化,轮虫死亡。每次培养可维持15~25天,多者到1个月,即应全部采收,清池后,开始新一轮的培养。
封闭式培养系统的连续培养目前在中国轮虫生产中尚未被采用。
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