一 : pcr 为什么要同时用上下游引物

pcr 为什么要同时用上下游引物

可以只用上游,或者下游引物吗?是不是同时用上下游,这样才能P出想要的大小片段.如果只用上游或者下游,会P的过大或者过小

pcr 为什么要同时用上下游引物的参考答案

你理解的没错.上下游引物同时用才能特异性扩增中间的那部分片段.

二 : 引物篇：普通PCR 和 QPCR 引物异同点

    Q问题： 普通PCR 和 QPCR 引物 是否一样？A 回答：二者的设计原则有相同也有不同；相同处：•序列的查找是一致的；•序列选取应在基因的保守区段；•选取合适的扩增片段大小•避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对；•避免引物自身形成环状发卡结构；•Tm值在55－65℃，GC含量在40%－60%；•引物之间的TM相差避免超过2℃；•引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基；不同处： Real time PCR引物•PCR 产物长度；real-time PCR要求在300bp以内，一般首选80-150bp 之间；•多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物；•目的基因含量比较低时，需要设计灵敏度比较高的引物；•相对电泳法，Real time PCR灵敏度比较高，对引物的要求更高，引物二聚体要少；熔解曲线要求单一产物；•Real time PCR的目的是进行定量或者相对定量，对扩增的效率有要求；对引物的二级结构要求高；普通PCR 引物：•根据实验的要求不同，长度一般是从150bp到几千bp 不等；•对二级结构要求没有real time PCR 高；•对扩增效率要求不高；•可以选用梯度PCR 仪，选择不同退火温度，对引物退火温度要求不需要一致；验证时不同：引物的特异性（相同点）：Ø引物的特异性在使用前用blast 来保证；不同点：real time PCRØ在实验结果中通过熔解曲线来验证；ØPCR的特异性产物峰应与引物报告中的PCR product 相差在两度之内；普通PCR 通过产物的长度，跑条带，来鉴别产物的特异性；Real time PCR 可以通过扩增曲线，熔解曲线分析来鉴别产物的相对量，同时也可以对终产物进行电泳分析，更全面，更科学！ 本文标题：pcr引物-pcr 为什么要同时用上下游引物
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