一 : 怎么培养酵母菌？
怎么培养酵母菌?
一般用PDA（土豆和糖）培养基在28-35度培养.发面用的干酵母中就有酵母菌. 培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等.有的培养基还含有抗菌素和色素.
按所用原料不同,可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基.化学试剂中的培养基,大多为合成培养基.由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末.培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同.一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存.对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基）,较长时间的贮存,必须放在2~6.C的冰箱内.
常见培养基有：
1、细菌培养基
配方一 牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,
水 100毫升
在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热.待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底.等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟.
配方二 马铃薯培养基
取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨.在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时.过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右.每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用.
配方三 根瘤菌培养基
葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克
碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克
酵母粉 0.4克 琼脂 20克
水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升
先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用.
2、放线菌培养基
配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
琼脂 2克 水 100毫升
先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解.在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水.调整pH值到7.2～7.4,分装后灭菌,备用.
配方二 面粉琼脂培养基
面粉 60克 琼脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟.另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用.
3、真菌培养基
配方一 萨市（Sabouraud’s）培养基
蛋白胨 10克 琼脂 20克
麦芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖（或葡萄糖）,搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用.
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的.
配方二 马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分.在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖）,补足水分,分装,灭菌,备用.
把这培养基的pH值调到7.2～7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌.
配方三 黄豆芽汁培养基
黄豆芽 100克 琼脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟.用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用.
把这培养基的pH值调到7.2～7.4,可用来培养细菌和放线菌.
配方四 豌豆琼脂培养基
豌豆 80粒 琼脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用.
4、食用菌菌种培养基
配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
20%马铃薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 琼脂 18克
把马铃薯洗净去皮后,切成小块.称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤.在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁.在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用.使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定.
配方二 综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁 1000 毫升
磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克
葡萄糖 20克 维生素 10毫克
琼脂 18克
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上.在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6.分装,灭菌,备用. 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种.
5.烟草的培养基
在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
愈伤组织诱导培养基制备
以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.
烟草叶片愈伤组织诱导
取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解
剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种
5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同
样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观
察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.
器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.
愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发
生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为
60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植
体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整
个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.
特殊培养基：
一 选择性培养基
1酵母菌富集培养基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%
孟加拉红0.003% pH4.5
2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%
二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%
二 鉴别培养基
EMB培养基,常用于鉴别E.coli
蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g
蒸馏水1000g pH7.2
分离海洋微生物的培养基配方
2216E培养基配方（固体培养基）
蛋白胨 5克
酵母膏 1克
磷酸高铁 0.01克
琼脂 15-----20克
陈海水 1000毫升
煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8
二 : 酵母菌的培养和观察
酵母菌的培养和观察 [日期：2007-02-27] 来源：sy 作者：生物实验室 [字体：大 中 小] [dvnews_page]
目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。（www.61k.com］
实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。 材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。 步骤
1．观察酵母菌
（1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。
（2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。
2．培养酵母菌
（1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。
（2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。
注意事项
1．观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其他杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其他杂菌区分开来。
2．发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。
酵母菌培养 酵母菌的培养和观察
分析和讨论
酵母菌是少数能在缺氧环境里生存较长时间的一种微生物，它属于兼性菌类。(www.61k.com］在一般情况下进行有氧呼吸。如环境中有丰富的糖类，它进行缺氧呼吸。其过程如下：
1．C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦（有氧呼吸）
2．C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+109×103兆焦（缺氧呼吸）
建议培养酵母菌还可以采用下列两种方法。
1．用乳酸、豆芽汁和蔗糖液培养
（1）取10克豆芽放入100毫升水中，加热煮沸半小时，盛起，用细布过滤。在滤液里加5克蔗糖和5毫升乳酸，配成液体培养液。
（2）把鲜酵母半块或老面（发酵后晾干的面粉团）打碎，投入培养液中，放在黑暗温暖的地方，二三天后就可以培养出大量酵母菌。
2．用巴斯德培养液培养
酵母菌需要的无机营养来自外界环境。如果在培养液内适当增加氮、磷等元素，效果会更好。巴斯德培养液的配方如下：
蔗糖15克，碳酸铵1克，磷酸氢钾0．2克，磷酸钙0．02克，硫酸镁0．02克，蒸馏水100毫升，培养方法跟上述的相同。
酵母菌是一些单细胞真菌。酵母可以通过出芽进行无性生殖，也可以通过形成子囊孢子进行
酵母菌培养 酵母菌的培养和观察
有性生殖。[www.61k.com]无性生殖即在环境条件适合时，从母细胞上长出一个芽，逐渐长到成熟大小后与母体分离。在营养状况不好时，一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子，在条件适合时再萌发。
培养酵母最适pH 值为pH4.5-5.0。最适生长温度一般在28℃~30℃之间。
酿酒酵母，用到的培养基有：
1、酵母完全培养基YPD：酵母提取物10g，蛋白陈20g,葡萄糖20g，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
2、SC（合成完全培养基）培养基（用于筛选酵母转化子）：YNB（不含氨基酸的酵母氮源）
6.7g，葡萄糖20g，加入相应的氨基酸，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。 由于葡萄糖和氨基酸，灭菌是用115度，30min的灭菌条件。
液体摇菌时一般在30度下摇24－30min，就可以，固体培养一般在30度下要3－5天。
酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤：
取1L酵母，诱导完后，离心（centrifugation）收菌体，称湿重，用蛋白（protein）纯化buffer悬浮菌体，重量（g）：buffer体积（毫升）＝1：1－－1：2。用注射器将菌液加入液氮中，控制加入速度，使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块。将菌体液氮颗粒转入高速打碎器（用的是打碎草药的机器，RMB600）中，注意不要将多余液氮倒入，大约2－3万转/分破碎1分钟，菌体颗粒应该成粉末状。倒出粉末，37度水浴融化后，再用注射器加入液氮中，重复上述步骤，重复3次。高速（20000rpm，4度30分）离心（centrifugation）收上清，如上清杂质较多，需要多离几遍，上清中目标蛋白（protein）纯化同E.coli.
三 : 19酵母流加培养
酵母流加培养实验
摘要：此实验使用的菌种为酿酒酵母，其呼吸活力对游离的葡萄糖十分敏感。在发酵罐中，采用流加补加技术和分批补料培养方式，观察菌种生长，记录酵母菌扩培过程及发酵过程菌种生长情况，测定酵母培养过程中还原糖、pH和酵母浓度的变化，画出各自变化曲线并分析。发现此酵母菌种在葡萄糖的浓度为0.4~0.8之间时，生长速率较快，活力较高，葡萄糖利用率高。
关键词：酵母 发酵罐 流加培养
The Experiments on Fed-batch Incubation of The Yeast
Cuijiali
(the college of life science，grade 6，bioengineering，510630)
Abstract:the fungus used in this experiment is the yeast. Respiratory activity of the yeast is sensitive for the dissociative glucose. We observe the growth of the yeast which grow though the Fed-plus technology and Fed-batch incubation in the fermenter and find that the yeast have a fast growth rate ,a high energy and high rate of the glucose decomposition when the the concentration of glucose of the medium is 0.4 to 0.8,
Keywords: Yeast Fermenter Fed-plus technology Fed-batch
前言：
以葡萄糖为碳源，通风培养酵母的过程中，培养基中的葡萄糖浓度是限制机制。本实验目的是获得最大酵母浓度，而培养基葡萄糖浓度对于酵母得率至关重要，因此采用流加培养较为理想。酵母的呼吸活力对游离的葡萄糖十分敏感，当其浓度踩0.8g/L以上时即出现阻遏作用（反巴斯德效应），所以不能采用恒速流加法，而采用变速流加法，每隔一个小时测定一次培养基中的还原糖含量，及时调整培养基含糖量及pH，从而使酵母保持最大生长速率。
1 材料及方法：
1.1材料
1.1.1菌种：酿酒酵母 1.1.2培养基（g/L）：（NH4）K2SO4 4.0,Na2HPO4-2H2O 2.0,MgSO4 0.5,CaCl2 2SO4 4.0，
NH4Fe(SO4)2-12H2O 0.02,葡萄糖 0.5，盐溶液10mL[(mg/L):ZnSO4-7H2O 0.2, CuSO4-5H2O 0.01],含维生素和微量营养物质的溶液1.0ml[(mg/L):维生素B1 0.2，烟酸 5.0 ，对氨基苯甲酸 0.3，泛酸（盐）0.5，生物素 0.006，内消旋肌醇 50，维生素B6 1.0]，pH ,加消泡剂0.4% 1.1.3流加用葡萄糖液（10g/100mL），发酵液pH调节用10%NaOH ， 1.1.4酵母斜面培养基：10°麦芽汁固体斜面 1.1.5酵母摇瓶培养基：10°麦芽汁，pH5.0 1.2培养方法：
1.2.1流加前准备
检查发酵罐，确定无损坏故障后，将流加用葡萄糖液、调节pH用10%NaOH接上发酵罐，发酵罐中倒入培养基，加入消泡剂，密封后进行高压灭菌。 1.2.2种子培养
将斜面酵母种子接入两个装有150mL酵母摇瓶培养基的250mL三角瓶中，置于下ZHWY-2102双层大容量全温度恒温培养振荡器中，在30℃下摇瓶培养15h； 1.2.3流加培养
接好所有发酵罐管道，调整好所有阀门，把酵母连同种子培养基一同接入发酵罐中，并作第一次取样，测定葡萄糖浓度。在开始培养后，每一个小时取样一次，用菲林试剂法测定发酵液中葡萄糖浓度，当葡萄糖浓度低于0.8g/L时进行葡萄糖流加，设置好控制设备，控制溶氧浓度在10%左右，调节通气量在3-5L/min ，pH5.0，培养10h。 1.3分析方法 1.3.1菌体量（X）
用去离子水适当稀释培养液，测干燥重量时，用事先干燥至恒重的定量滤纸，先测定其重量，然后用这张滤纸过滤培养液，再将其干燥至恒重（105℃，2h），用分析天平称重。
1.3.2葡萄糖浓度：菲林法测还原糖
①菲林试剂的标定
吸取菲林试剂甲液、乙液各5.00ml于100ml三角瓶中，用微量滴定管加入9ml 0.1%标准葡萄糖溶液（其预加量应控制在后滴定时消耗0.1%标准葡萄糖溶液在1ml以内，如有超过或不足，则应增加或减少最初加入标准葡萄糖溶液的体积，重新滴定），混匀后置加热器上加热，使之在2min内沸腾。然后以4~5s一滴的速度继续滴入0.1%标准葡萄糖溶液，直至蓝色。紫红色小时为止，记录消耗0.1%标准葡萄糖溶液的总体积V0.
②培养液的预测
将培养液过滤后，吸取滤液2.00ml，加入盛有费林试剂甲乙液各5.00mL的100mL三角瓶，加7ml的水，置电热套上加热，继续同前标定操作，记下滴定用去0.1%的标准葡萄糖溶液的总体积V1
③正式滴定
吸取滤液2.00ml，加入盛有费林试剂甲乙液各5.00mL的100mL三角瓶，加（V1-1）
ml0.1%的标准葡萄糖溶液，加（7-V1+1 ）mL的水，混匀后置电热套上加热，继续同前
标定操作，记下滴定用去0.1%的标准葡萄糖溶液的总体积V（后面的滴定中，滴入的糖
液的体积应控制在0.5-1ml）
葡萄糖浓度S（g/L）=
(V0?V)?c
?1000
2.00
式中 V0----费林试剂标定中消耗的标准的葡萄糖溶液的体积，mL；
V----试样测定中消耗标准葡萄糖溶液的体积，mL；
c----标准葡萄糖溶液浓度（mL）。
1.3.3计算 一、
每一小时取培养液20~25ml（最后一组取100ml），并记下V取（取样口除在取样时，浸
泡在75%酒精中，保持清洁，以免污染发酵罐中的发酵液）。 二、
拿烘干箱里的滤纸称重m0，取上述培养液过滤，过滤完后将滤纸烘干，2小时后称重，
记下m。 三、
取5ml（或以上）的滤液做葡萄糖的滴定。
1. 所加溶液如下（加于三角瓶中）
2.
每次做2次重复的实验，第二次实验要根据第一次的用标准葡糖的体积进行预加，使第二次滴加的体积在1ml内。记下两次用的标准葡糖的体积，V1,V2。
3. 流加计算： 培养液的葡糖浓度：
取1ml样：C（g/L）= 11.7 - （V1+ V2）/2；取2ml样： C（g/L）=5.85 - （V1+ V2）/4 V加(ml)=（3-3C）/ 0.15
4. 往发酵罐里加V加的浓葡萄糖（10g/100ml）。 四、
酵母总质量计算：
M酵 = (m- m0)×3000/V取 五、
酵母得率计算
酵母得率=菌体总量/消耗葡萄糖总量 六、
数据计算
V瓶=?V流加+3000+V接入—?V取 M菌体=M瓶+?M取—M0 M0 =V0*C0 M’消耗=M’接入+M’流加—M’瓶—?M'取
其中V瓶——发酵罐内残留的液体体积
M菌体——菌体总量 M’消耗——消耗的葡萄糖总量
其他的如此类推。
2 结果与分析
2.2 酵母得率
葡萄糖消耗量：T耗=0.00157*（3000+150*2）+0.1*（1.25+5+3.38+1.88+1.88+4.125+4.5）
-0.0005625*（3300+1.25+3.38+1.88+1.88+4.125+4.5-23.5-25-20-23-30-30-27.5-30-27）
=5.50g 菌
体
的
总
增
长
量
：
?M总
=0.974*0.001*
（3300+1.25+3.38+1.88+1.88+4.125+4.5-23.5-25-20-23-30-30-27.5-30-27）-0.001*（0.556*25+0.73*20+0.652*23+0.583*30+0.69*30+0.647*27.5+0.63*30+0.974*27）-0.536*0.001*（3000+150*2）=1.1g 酵母得率，YX/S，g/g
YX/S?
培养液产生的菌体干重总量
消耗的葡萄糖总量
?
?M总
=0.20g/g T耗
3 讨论
本次试验出现了较多意外情况，首先在发酵罐在灭菌过程中，多条流加管断裂导致流加用氢氧化钠、罐内培养基倒流，以致罐内培养基实际总量无法估量。
然后，最后一组数据显示菌体在生长旺盛时突然全部消失，其数量甚至导致菌体量低于接种时的量，但是葡萄糖浓度仍在降低。考虑如果原因为菌体大规模死亡，菌体在死亡后并不会裂解，所以总菌体量不应降低；如果为自然凋亡及裂解，培养基中并没有可以导致菌体突然凋亡的毒性物质；如果考虑为细菌污染，则培养液pH值应该迅速下降，且菌体量应该不
19酵母流加培养_酵母菌培养
降反升（因为所污染并繁殖的细菌也会被收集到滤纸上并参与称量）；如果为烈性噬菌体感染，能在一个小时内令所有菌体全部裂解的噬菌体似乎并不可能。由于所学知识中，已知合理原因均不能解释现象，所以将该数据定性为严重操作失误或者仪器缺陷导致的不可信数据，在最后计算中忽略该数据。
在采用的九组数据中，可以看出，在开始的一个小时内，葡萄糖含量急剧下降，但是菌体浓度并没有明显增加，该菌在这个阶段应该还处于停滞期，而且葡萄糖浓度达到了1.57，应该会出现反巴斯德效应。效应是在高浓度的葡萄糖培养基和有氧条件下培养细胞时，发现细胞生长受到抑制且生成乙醇的现象而得名。此效应也称葡萄糖效应，主要是细胞对葡萄糖的摄取的生物能转换受到了限制。
经后人研究认为：在酵母系统中主要是，在高葡萄糖时抑制了细胞色素a的合成，使积累的NaOH + H+ 抑制丙酮酸脱氢酶系统，从而使丙酮酸进入不了三羧酸循环并诱导出丙酮酸脱羧酸而使丙酮酸形成乙醇。
在最初的6个小时中，葡萄糖含量一直在缓慢下降，但是菌体并没有很明显的增加。为了保持葡萄糖含量，我们共流加了22mL的葡萄糖溶液。经过6个小时的适应后，葡萄糖量亦降到了0.8以下，从第九个小时开始，酵母开始大量增殖，进入指数增长期。
实验中，培养基pH值有轻微下降，但均保持在6.3-6.7之间。
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[3]曹军卫，马辉文，张甲耀，等.微生物工程[M].北京：科学出版社，2007.
[4]张惠展．基因工程概论EM]．上海：华东理工大学出版
社，2000．
[5]周海英，袁景淇，邓建慧，等．重组毕氏酵母发酵过程
的结构模型研究[J]．上海交通大学学报，2002，36 (10)：l443一l447．
四 : 酵母菌的培养和观察
酵母菌的培养和观察 [日期：2007-02-27] 来源：sy 作者：生物实验室 [字体：大 中 小] [dvnews_page]
目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。
实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。 材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。 步骤
1．观察酵母菌
（1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。
（2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。
2．培养酵母菌
（1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。
（2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。
注意事项
1．观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其他杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其他杂菌区分开来。
2．发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。
分析和讨论
酵母菌是少数能在缺氧环境里生存较长时间的一种微生物，它属于兼性菌类。在一般情况下进行有氧呼吸。如环境中有丰富的糖类，它进行缺氧呼吸。其过程如下：
1．C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦（有氧呼吸）
2．C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+109×103兆焦（缺氧呼吸）
建议培养酵母菌还可以采用下列两种方法。
1．用乳酸、豆芽汁和蔗糖液培养
（1）取10克豆芽放入100毫升水中，加热煮沸半小时，盛起，用细布过滤。在滤液里加5克蔗糖和5毫升乳酸，配成液体培养液。
（2）把鲜酵母半块或老面（发酵后晾干的面粉团）打碎，投入培养液中，放在黑暗温暖的地方，二三天后就可以培养出大量酵母菌。
2．用巴斯德培养液培养
酵母菌需要的无机营养来自外界环境。如果在培养液内适当增加氮、磷等元素，效果会更好。巴斯德培养液的配方如下：
蔗糖15克，碳酸铵1克，磷酸氢钾0．2克，磷酸钙0．02克，硫酸镁0．02克，蒸馏水100毫升，培养方法跟上述的相同。
酵母菌是一些单细胞真菌。酵母可以通过出芽进行无性生殖，也可以通过形成子囊孢子进行
有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时，从母细胞上长出一个芽，逐渐长到成熟大小后与母体分离。在营养状况不好时，一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子，在条件适合时再萌发。
培养酵母最适pH 值为pH4.5-5.0。最适生长温度一般在28℃~30℃之间。
酿酒酵母，用到的培养基有：
1、酵母完全培养基YPD：酵母提取物10g，蛋白陈20g,葡萄糖20g，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
2、SC（合成完全培养基）培养基（用于筛选酵母转化子）：YNB（不含氨基酸的酵母氮源）
6.7g，葡萄糖20g，加入相应的氨基酸，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。 由于葡萄糖和氨基酸，灭菌是用115度，30min的灭菌条件。
液体摇菌时一般在30度下摇24－30min，就可以，固体培养一般在30度下要3－5天。
酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤：
取1L酵母，诱导完后，离心（centrifugation）收菌体，称湿重，用蛋白（protein）纯化buffer悬浮菌体，重量（g）：buffer体积（毫升）＝1：1－－1：2。用注射器将菌液加入液氮中，控制加入速度，使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块。将菌体液氮颗粒转入高速打碎器（用的是打碎草药的机器，RMB600）中，注意不要将多余液氮倒入，大约2－3万转/分破碎1分钟，菌体颗粒应该成粉末状。倒出粉末，37度水浴融化后，再用注射器加入液氮中，重复上述步骤，重复3次。高速（20000rpm，4度30分）离心（centrifugation）收上清，如上清杂质较多，需要多离几遍，上清中目标蛋白（protein）纯化同E.coli.
五 : 酵母菌的培养和观察实验方法与步骤
目的 认识酵母菌 的形态特征，了解培养酵母菌的方法。实验前的思考 人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜 ，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。
。www.61k.com）材料器具 甜酒酿汁液，新鲜酵母 ，豆芽;显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮;蔗糖，乳酸，碘液。
步骤
1.观察酵母菌
(1)用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡(图示)。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。
(2)在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。
2.培养酵母菌
(1)用蔗糖液培养 在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀;再用棉絮塞紧瓶口。然后把烧瓶放在 25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。
(2)二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。
注意事项
1.观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其他杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其他杂菌区分开来。
2.发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。
分析和讨论
酵母菌是少数能在缺氧环境里生存较长时间的一种微生物，它属于兼性菌类。在一般情况下进行有氧呼吸。如环境中有丰富的糖类，它进行缺氧呼吸。其过程如下：
1.C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦(有氧呼吸)
2.C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+109×103兆焦(缺氧呼吸)
建议 培养酵母菌还可以采用下列两种方法。
1.用乳酸、豆芽汁和蔗糖液培养
(1)取10克豆芽放入100毫升水中，加热煮沸半小时，盛起，用细布过滤。在滤液里加5克蔗糖和5毫升乳酸，配成液体培养液。
(2)把鲜酵母半块或老面(发酵后晾干的面粉团)打碎，投入培养液中，放在黑暗温暖的地方，二三天后就可以培养出大量酵母菌。
2.用巴斯德培养液培养
酵母菌需要的无机营养来自外界环境。如果在培养液内适当增加氮、磷等元素，效果会更好。巴斯德培养液的配方如下：
蔗糖15克，碳酸铵1克，磷酸氢钾0.2克，磷酸钙0.02克，硫酸镁0.02克，蒸馏水100毫升，培养方法跟上述的相同。
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